【摘 要】
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从地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis） ATCC16580中克隆得到角蛋白酶基因kerA,将其构建在芽孢杆菌表达载体p LIYU-2上,再转化到解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens） T
【机 构】
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工业发酵微生物教育部重点实验室天津科技大学生物工程学院; 山东隆科特酶制剂有限公司; 天津科技大学化工与材料学院;
【基金项目】
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国家重点研发计划,项目编号:2017YFB0308401
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从地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis） ATCC16580中克隆得到角蛋白酶基因kerA,将其构建在芽孢杆菌表达载体p LIYU-2上,再转化到解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens） TCCC111018中,构建出高产角蛋白酶重组菌株TCCC111018/p LIYU-2-kerA。重组菌株在羽毛发酵培养基中12h内即可将羽毛全部降解,在摇瓶发酵培养基中36h酶活力达到1 361. 54U/m L。重组角蛋白酶最适温度为65℃,最适p H值为9,在40～60℃和p H值9～11范围内具有良好的稳定性。蛋白电泳（SDS-PAGE）分析表明,重组角蛋白酶分子质量约为31kD。Na+,K+、Ca2+及Mg2+能显著促进角蛋白酶活力,Cu2+和Fe3+对重组角蛋白酶有明显的抑制作用。高效液相色谱（HPLC）分析显示,羽毛酶解液中以缬氨酸、异亮氨酸和苯丙氨酸为主,另外也含有较多的酪氨酸和胱氨酸,游离氨基酸浓度为14. 59μmol/m L。
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