【摘 要】
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目的 研究在大肠杆菌中高效表达人促黄体激素释放素-血管生成素(luteinizing hormone releasing hormone-angiogenin,LHRH-Ang)重组毒素及其复性的方法.方法 利用分子生物学
【机 构】
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倪志立,吉林省人民医院耳鼻咽喉科,北京地坛医院耳鼻咽喉科
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目的 研究在大肠杆菌中高效表达人促黄体激素释放素-血管生成素(luteinizing hormone releasing hormone-angiogenin,LHRH-Ang)重组毒素及其复性的方法.方法 利用分子生物学技术构建pET28a/LHRH-Ang表达载体,序列测定验证融合基因的正确性.将测序正确的质粒转化在大肠杆菌BL21(DE3)中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropyl-β-D-Thiogalactoside,IPTG)诱导观察重组毒素的表达.采用梯度透析法对以包涵体形式表达的重组毒素进行复性研究.结果 利用基因工程技术,成功构建了表达LHRH-PⅡ-Ang重组毒素的原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)后经IPTG诱导,重组毒素以包涵体的形式获得了表达,其表达量占菌体蛋白总量的18.43%.通过细胞裂解、8 mol/L尿素的变性溶解和二氨基乙基琼脂凝胶(diethyl-aminoethyl DEAE)纯化过程,获得纯度达85%的目的蛋白.用梯度透析法对变性蛋白进行复性,复性重组毒素的质量浓度为1.27 mg/ml.结论 应用墓因工程技术能够成功构建LHRH-Ang重组毒素,并在大肠杆菌中获得高效表达,以包涵体形式存在的重组毒素经梯度透析可以获得有效的复性.
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