桦木酸通过调节PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导人结肠癌细胞SW620凋亡及自噬

来源 :中国实验方剂学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sfyuya007
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目的:研究桦木酸对人结肠癌细胞SW620凋亡和自噬的影响及磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路在其中的调控作用。方法:采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测细胞活性以确定最佳给药时间及给药量用于后续实验;设置桦木酸给药空白、低、中、高剂量组。采用苏木精-伊红(HE)染色法观察桦木酸对SW620细胞形态的影响。采用Annexin-V/PI双染法检测SW620细胞凋亡率。分别采用Hoechst33258染色法及MDC法观察细胞凋亡和自噬体发生情况。采用Western blot法检测细胞中Bcl-2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸蛋白水解酶-9(Caspase-9)、活化的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cleaved-Caspase-3),微管相关蛋白Ⅰ轻链3(LC3)、自噬关键分子酵母Atg6同系物1(Beclin-1)、p62、磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化Akt(p-Akt)、磷酸化mTOR(p-mTOR)的表达情况。结果:桦木酸以浓度、时间依赖性的方式抑制SW620、HT29、HCT116细胞的活性;与桦木酸给药24 h比较,给药48 h细胞活性显著降低(P<0.05,P<0.01),给药48 h的IC50显著降低(P<0.01),其中SW620细胞给药48 h的IC50值最小。HE法、Hoechst33258染色后,桦木酸给药组可见浓度依赖性细胞凋亡;MDC染色后,可见细胞自噬体数量增加。与空白组比较,桦木酸给药组细胞凋亡率显著升高(P<0.05,P<0.01)。与空白组比较,桦木酸给药组Bax、Caspase-9、Cleaved-Caspase-3、LC3 II蛋白表达水平显著升高(P<0.05,P<0.01),中、高剂量组Beclin-1蛋白表达显著升高(P<0.01);p62、p-Akt、p-PI3K、p-mTOR蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论:桦木酸对SW620细胞活性有明显的抑制作用,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路从而诱导人结肠癌细胞SW620的凋亡及自噬有关。
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