绵羊重组朊蛋白的原核表达与结构分析

来源 :中国预防兽医学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:haofei88
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利用DNA重组技术,将绵羊朊病毒正常成熟蛋白基因OvPrP^C插入表达载体pET30a,在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,获得的表达产物为绵羊朊蛋白OvPrP(234256),经SDS—PAGE分析,表达产物以包涵体形式存在.将包涵体蛋白用8mol/L尿素溶解,在变性条件下经Ni—NTA柱亲和层析纯化,而镍柱能竞争性结合含有6×His标签的pET30a表达的目的蛋白,由于目的蛋白是在变性条件下纯化的,需要将其复性后才能恢复天然构象、采用梯度尿素透析复性后,复性率为25%左右。为了进行重组朊
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