【摘 要】
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目的建立MTB蛋白酶体抑制剂体外筛选模型。方法根据荧光底物N－琥珀酰基－亮氨酸－亮氨酸－缬氨酸－酪氨酸－7－氨基－4－甲基香豆素(S－LLVY－AMC)在蛋白酶体作用下发生水解，释放出具有荧光的7－氨基－4－甲基香豆素(AMC)，且荧光值与蛋白酶体活性呈正比的原理，建立蛋白酶体抑制剂体外筛选模型，并对该体系中影响蛋白酶体活性的反应时间及十二烷基磺酸钠(SDS)、蛋白和底物浓度进行优化，利用已知蛋白
【机 构】
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201203 上海中医药大学病原微生物教研室,201203 上海中医药大学病原微生物教研室,
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目的建立MTB蛋白酶体抑制剂体外筛选模型。
方法根据荧光底物N－琥珀酰基－亮氨酸－亮氨酸－缬氨酸－酪氨酸－7－氨基－4－甲基香豆素(S－LLVY－AMC)在蛋白酶体作用下发生水解，释放出具有荧光的7－氨基－4－甲基香豆素(AMC)，且荧光值与蛋白酶体活性呈正比的原理，建立蛋白酶体抑制剂体外筛选模型，并对该体系中影响蛋白酶体活性的反应时间及十二烷基磺酸钠(SDS)、蛋白和底物浓度进行优化，利用已知蛋白酶体抑制剂MG132及8种天然产物对该模型进行验证。对荧光值的影响因素进行直线相关与回归分析。
结果MTB蛋白酶体抑制剂体外筛选模型中SDS为0.34 mg/L，蛋白浓度为25 mg/L，底物S－LLVY－AMC浓度为64 μmol/L，反应时间为30 min。利用MG132及药物A～H天然产物对MTB蛋白酶体筛选模型进行验证，经计算得出MG132半抑制浓度为49 μmol/L。在终浓度为200 μmol/L时，8种天然产物对MTB蛋白酶体的抑制率分别为0.0%、3.1%、7.8%、45.2%、52.4%、69.5%、69.6%和88.7%。证实该模型具有重复性及可靠性。
结论本研究成功建立MTB蛋白酶体抑制剂体外筛选模型，该模型为快速、较大规模筛选MTB蛋白酶体抑制剂提供良好的技术平台。
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