【摘 要】
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豇豆根瘤中含有大量豆血红蛋白。该蛋白是良好的天然色素，可用于人造肉的着色，本文将携带豇豆血红蛋白Lb Ⅱ基因的质粒p ET-15b转化进入大肠杆菌BL21中表达，并对表达条件进行优化。通过查找NCBI数据库得到一条全长456 bp的豇豆血红蛋白Lb Ⅱ的序列，以p ET-15b作为表达载体，大肠杆菌BL21-Codon Plus（DE3）-R-IL作为重组工程菌进行表达，成功表达出豇豆血红蛋白Lb
【机 构】
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齐鲁工业大学(山东省科学院)食品科学与工程学院
【基金项目】
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山东省重点研发计划（重大科技创新工程2020CXGC010604）；
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豇豆根瘤中含有大量豆血红蛋白。该蛋白是良好的天然色素，可用于人造肉的着色，本文将携带豇豆血红蛋白Lb Ⅱ基因的质粒p ET-15b转化进入大肠杆菌BL21中表达，并对表达条件进行优化。通过查找NCBI数据库得到一条全长456 bp的豇豆血红蛋白Lb Ⅱ的序列，以p ET-15b作为表达载体，大肠杆菌BL21-Codon Plus（DE3）-R-IL作为重组工程菌进行表达，成功表达出豇豆血红蛋白Lb Ⅱ，并使用镍柱层析对蛋白进行初步纯化，同时添加抗坏血酸为抗氧化剂。以IPTG浓度、温度、时间为自变量，Lb Ⅱ表达量为因变量进行单因素实验。结果表明，在IPTG终浓度为1.0 mmol/L、诱导温度为25℃，时间为14 h时，重组豆血红蛋白Lb Ⅱ的表达量最高，经SDS-PAGE凝胶电泳和可见光光谱分析法鉴定为目的蛋白Lb Ⅱ。经响应面试验优化后，表达量可以达到7.30μg/m L。本研究为后续使用工程菌发酵生产豆血红蛋白奠定了基础。
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