microRNA-93靶向调控Rho相关激酶2/LIMK/Cofilin通路影响骨癌痛小鼠痛行为

来源 :国际麻醉学与复苏杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chenjason886
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目的

观察microRNA-93(miR-93)及Rho相关激酶(rho associated coiled-coil forming protein kinase, ROCK)通路对小鼠骨癌痛(bone cancer pain,BCP)行为的影响并探讨其潜在机制。

方法

将C57BL/6J小鼠采用随机数字表法分为对照组(Control组)、假手术组(Sham组)及BCP组、BCP+PBS组、BCP+Y-27632(ROCK抑制剂)组,每组13只。建模前1 d及建模后3、5、7、10、14 d进行动物痛行为学评估,观察小鼠对机械和热刺激的反应。建模后第14天处死小鼠,取术侧L4~L6背根神经节(dorsal root ganglion,DRG),SYBR Green实时荧光定量PCR法观察miR-93表达变化,双荧光素酶实验检测miR-93对ROCK2基因的靶向调控。Western blot法观察ROCK2、LIMK(LIM domain kinase, LIMK)和Cofilin蛋白在DRG神经元中表达。

结果

C57BL/6J小鼠股骨接种NCTC2472细胞后,患侧后肢分别在第5、7天开始出现明显的触诱发痛[Sham组(6.81±1.04)g,BCP组(5.12±0.47)g]和热痛过敏[Sham组(11.75±1.46)s,BCP组(7.61±1.07)s],并呈进行性加重(P<0.05);BCP组小鼠miR-93表达随疼痛加重呈时间依赖性降低,而ROCK2表达呈时间依赖性增加(P<0.05),进而激活LIMK/Cofilin通路。双荧光素酶实验证实miR-93可与ROCK2 mRNA 3'-UTR直接结合,从而发挥对ROCK2转录后翻译的抑制作用(P<0.05)。鞘内注射ROCK抑制剂能有效缓解小鼠触诱发痛[BCP+PBS组(3.43±0.89)g,BCP+Y-27632组(5.74±1.02)g]和热痛过敏[BCP+PBS组(5.48±1.03)s,BCP+Y-27632组(9.82±1.24)s],同时抑制通路主要因子ROCK2、磷酸化-LIMK(phospho-LIMK,p-LIMK)、磷酸化-Cofilin(phospho-Cofilin,p-Cofilin)的表达(P<0.05)。

结论

小鼠BCP疼痛过程中miR-93表达降低,进而激活ROCK2/LIMK/Cofilin通路,鞘内注射ROCK抑制剂可抑制该通路的活化,缓解小鼠BCP症状。

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