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目的
观察电脉冲下肝癌细胞半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3的表达水平及损伤效应。
方法按脉冲电场强度分为10组，对Hep-G2肝癌细胞脉冲放电，通过检测细胞Caspase-3活性、增殖活力、凋亡率及细胞色素C(Cyt C)、Caspase-3活化蛋白(Cleaved-Caspase-3)和半胱氨酸蛋白酶激活的DNA酶(CAD)的表达水平，判断损伤效应。
结果Caspase-3在脉冲处理后的肝癌细胞中高表达，其表达水平在750～1 750 V/cm随场强增加呈上升趋势(P<0.01)，在1 750～2 000 V/cm时达到顶峰(P>0.05)，随后场强继续上升，表达水平逐渐下降。电脉冲对细胞抑制能力与场强呈正相关，当处于2 250～2 750 V/cm时，增殖活力降至最低(P>0.05)。脉冲损伤包括诱导凋亡和坏死，凋亡效应于1 750～2 000 V/cm时达到峰值(P>0.05)，坏死效应在高于2 000 V/cm时显著上升，并于2 750 V/cm时达峰。蛋白质印迹法(Western blot)提示脉冲电场可引发Cyt C、Cleaved-Caspase-3及CAD表达上调(P<0.05)。
结论高频电脉冲可引发肝癌细胞Caspase-3表达增强，同时激活Cyt C信号通路诱导凋亡；当场强设定为1 750～2 000 V/cm时凋亡效应最明显。