【摘 要】
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肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157∶H7是食源感染的人兽共患病原菌.鞭毛蛋白(H7)是EHEC O157∶H7重要的毒力因子,其编码基因为flic.该研究在
【机 构】
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江苏省农业科学院兽医研究所,农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014
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肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157∶H7是食源感染的人兽共患病原菌.鞭毛蛋白(H7)是EHEC O157∶H7重要的毒力因子,其编码基因为flic.该研究在体外克隆和表达flic基因的可变区,并检测其免疫原性,旨在为EHEC O157∶H7疫苗的研制提供候选抗原.PCR扩增到flic基因538～1 483bp的可变区,成功克隆入冷诱导表达载体pCold Ⅰ中,构建重组表达质粒.重组菌BL21(pCold Ⅰ-flic)0.5mmol/LIPTG过夜诱导,SDS-PAGE和Western blotting进行鉴定.Balb/c小鼠免疫和攻毒试验评价重组H7蛋白的免疫原性.结果显示:H7基因(flic)片段945 bp在pCold Ⅰ中成功表达,大小为31 000,能够与天然EHEC O157∶H7全抗血清反应;免疫小鼠存活率可以达到80％,而非免疫小鼠存活率仅为20％;免疫组粪便排菌数最显著低于对照组(P＜0.05).以上结果说明,H7鞭毛的可变区与菌体黏附密切相关,并且其诱导产生的抗体具有一定的抑制黏附作用,可以作为亚单位疫苗研制的候选抗原,在EHEC O157∶H7早期黏附时,协同Ⅲ型分泌系统蛋白降低菌体在肠道内的黏附.
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