【摘 要】
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本研究旨在建立猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR-RFLP鉴别检测方法.根据Shimen株设计1对特异性引物,建立猪瘟病毒RT-PCR-RFLP检测方法；对20份疑似猪瘟临床样品进行检测,
【机 构】
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青岛农业大学山东省预防兽医学重点实验室,莱阳市畜牧局
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本研究旨在建立猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR-RFLP鉴别检测方法.根据Shimen株设计1对特异性引物,建立猪瘟病毒RT-PCR-RFLP检测方法；对20份疑似猪瘟临床样品进行检测,并对检出的山东8株流行野毒株和2株疫苗株PCR产物进行克隆与序列分析,验证上述方法.结果RT-PCR扩增片段为825 bp,产物经RFLP分析,野毒株的PCR产物能被ApaⅠ酶切为322 bp和503 bp 2个片段,兔化弱毒疫苗株则不能被酶切,检测出RNA的最低浓度为0.028 6 μg,mL-1;8株流行野毒株都含GGGCCC序列(ApaⅠ酶切位点),2株疫苗株相应序列为GAGCCC,不能被Apa Ⅰ酶切；8株流行野毒株属于基因2群,2株疫苗株与HCLV遗传关系近,为基因1群.建立了可鉴别猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR-RFLP检测方法,为猪瘟的防控提供有效手段.
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