【摘 要】
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目的 构建日本血吸虫重组双歧杆菌属两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum,Bb)pGEx-Sj14-3-3疫苗,并进行鉴定.方法 从日本血吸虫成虫中提取总RNA,通过RT-PCR扩增Sj14-3-3抗
【机 构】
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重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所寄生虫病研究室
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目的 构建日本血吸虫重组双歧杆菌属两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum,Bb)pGEx-Sj14-3-3疫苗,并进行鉴定.方法 从日本血吸虫成虫中提取总RNA,通过RT-PCR扩增Sj14-3-3抗原编码基因.将Sj14-3-3基因定向克隆到大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT中,构建重组质粒pGEX-Sj14-3-3.用重组质粒将大肠埃希菌BL21(DE3)转化为感受态细胞,抽提重组质粒进行双酶切,鉴定载体片段和基因片段长度:采用电穿孔法,用重组质粒pGEX-Sj14-3-3转化Bh,构建Bb(pGEX-Sj14-3-3)疫苗,抽提疫苗的质粒进行PCR鉴定,比较重新构建的pGEX-Sj14-3-3基因片段长度与日本血吸虫成虫中Sjl4-3-3基因片段长度是否相同.结果 RT-PCR扩增出的日本血吸虫成虫Sj14-3-3基因片段长度为399 bp;双酶切鉴定,重组质粒pGEX-Sj14-3-3载体片段长度为4947 bp,Sj14-3-3基因片段长度为399 bp;在重组的Bb(pGEX-Sj14-3-3)疫苗中,得到Sj14-3-3基因片段长度为399 bp,与预期的结果一致.结论 成功构建了日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj14-3-3)疫苗.
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