【摘 要】
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目的 探讨5-氮杂胞苷(5-Aza-dC)对结直肠癌细胞中TIP30基因表达的影响,并探讨其与氟尿嘧啶(5-Fu)敏感性的关系.方法 5-Aza-dC处理结直肠癌HCT116细胞,采用甲基化特异性PCR (MSP)方法检测TIP30基因启动子CpG岛甲基化状态,逆转录PCR检测TIP30 mRNA表达,Western blot法检测TIP30蛋白的表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测HCT116细
【机 构】
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目的 探讨5-氮杂胞苷(5-Aza-dC)对结直肠癌细胞中TIP30基因表达的影响,并探讨其与氟尿嘧啶(5-Fu)敏感性的关系.方法 5-Aza-dC处理结直肠癌HCT116细胞,采用甲基化特异性PCR (MSP)方法检测TIP30基因启动子CpG岛甲基化状态,逆转录PCR检测TIP30 mRNA表达,Western blot法检测TIP30蛋白的表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测HCT116细胞对5-Fu的敏感性.结果 未经5-Aza-dC处理的HCT116细胞中,TIP30基因启动子完全甲基化.5-Aza-dC处理HCT116细胞3d后去除5-Aza-dC,HCT116细胞TIP30基因非甲基化产物阳性,启动子去甲基化.随着5-Aza-dC去除时间的延长,HCT116细胞中TIP30基因启动子甲基化产物和非甲基化产物均为阳性,即启动子部分甲基化,部分非甲基化；去除5-Aza-dC第10天,TIP30基因启动子甲基化产物阳性,TIP30基因启动子重新甲基化.未经5-Aza-dC处理的结直肠癌HCT116细胞TIP30 mRNA和蛋白不表达.5-Aza-dC处理结直肠癌HCT116细胞3d后去除5-Aza-dC,TIP30 mRNA和蛋白表达明显增强.随着5-Aza-dC去除时间的延长,TIP30 mRNA和蛋白表达水平逐渐降低,第10天达到最低水平.在5-Aza-dC处理前、5-Aza-dC处理后去除5-Aza-dC的第0、10天,5-Fu作用于HCT116细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为41.62、33.17和4.96 μg/ml.结论 TIP30基因表达差异可能与其启动子甲基化状态有关,且TIP30基因启动子甲基化差异与结直肠癌细胞对化疗药物的敏感性相关.
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