【摘 要】
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目的：确定维生素D受体（vitamin D receptor,VDR）的核定位信号并验证其功能。方法：通过软件分析及文献调研预测VDR核定位信号，利用点突变试剂盒构建了VDR一系列点突变体，通过蛋白质免疫印迹检测VDR在胞质和胞核里的分布，并结合免疫荧光观察确定其预测突变点对VDR入核的影响，最后采用实时荧光定量链式聚合酶反应（quantitative real-time PCR,qPCR）检测V
【基金项目】
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国家自然科学基金（81873110）；
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目的：确定维生素D受体（vitamin D receptor,VDR）的核定位信号并验证其功能。方法：通过软件分析及文献调研预测VDR核定位信号，利用点突变试剂盒构建了VDR一系列点突变体，通过蛋白质免疫印迹检测VDR在胞质和胞核里的分布，并结合免疫荧光观察确定其预测突变点对VDR入核的影响，最后采用实时荧光定量链式聚合酶反应（quantitative real-time PCR,qPCR）检测VDR下游基因的表达，以判断VDR核定位突变体的活性。结果：确定VDR核定位信号序列为49RRSMKRKALFLT61，构建的VDR一系列核定位序列（nuclear localization sequence,NLS）点突变体在细胞内的表达主要分布在胞质里，维生素D（vitamin D,VD）既不能诱导这些点突变体入核，也不能促进VD下游基因表达。结论：VDR核定位确定信号能有效控制VDR进入细胞核发挥转录因子作用，进而影响其下游基因的表达，为探索VD及VDR相关疾病的治疗提供新平台和思路。
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