【目的】筛选出丝裂霉素C制备干细胞饲养层的最佳处理浓度,为建立完善干细胞饲养层培养体系奠定基础。【方法】以STO(SIM小鼠成纤维细胞耐硫代鸟嘌呤和耐鸟苯苷亚系)、MEF(原代分离的小鼠胎儿成纤维细胞)和BRL(大鼠肝细胞)为研究对象,分别以0、2.5、5.0、10.0、15.0、20.0μg/m L丝裂霉素C处理汇合度为90%~100%的STO、MEF、BRL细胞单层2 h,继续培养3 d后统计各处理组饲养层细胞的存活数量及增殖细胞比例,并用Ed U免疫荧光标记法检测细胞的增殖状况。【结果】随着丝裂霉素C处理浓度的增加,饲养层增殖细胞数量占总细胞数量的比例均呈逐渐降低趋势。丝裂霉素C处理STO、BRL、MEF的最佳浓度分别为5.0、10.0和10.0μg/m L,对应的增殖细胞比例分别为6.8%、3.0%和2.1%。【结论】丝裂霉素C能有效抑制干细胞饲养层细胞的增殖并保持良好活性,但不同饲养层细胞的最佳处理浓度有所差异。