【摘 要】
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目的:为进一步研究脑红蛋白(NGB)的生理功能并为基因治疗缺血性脑损伤提供有效的表达载体,应用细菌内同源重组方法分别构建含NGB及绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组腺病毒表达载
【机 构】
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军事医学科学院放射与辐射医学研究所
【基金项目】
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国家重点基础研究发展计划(973计划);解放军医药卫生科研项目;北京市自然科学基金;国家自然科学基金
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目的:为进一步研究脑红蛋白(NGB)的生理功能并为基因治疗缺血性脑损伤提供有效的表达载体,应用细菌内同源重组方法分别构建含NGB及绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组腺病毒表达载体,并对其进行鉴定.方法:用电转方法将腺病毒基因组质粒pAdEasy-1导入BJ5183细菌,制备BJ5183-pAdEasy-1细菌,再以后者作为电感受态细菌,与线性化质粒pShuttle-CMV-NGB进行同源重组,获得重组腺病毒质粒pAdEasy-NGB,转染293细胞,制备含脑红蛋白基因的重组腺病毒.结果:通过PCR、序列测定和Western印迹杂交鉴定,确认该重组腺病毒表达载体可正确表达脑红蛋白.结论:成功地构建了表达NGB基因的重组腺病毒载体,为深入开展脑红蛋白的功能研究以及用于缺血性脑损伤疾病的基因治疗奠定了基础.
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