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斑蝥素可抑制蛋白磷酸酶2A(PP2A),并抑制胰腺癌细胞生长[1].我们发现,斑蝥素可激活c-Jun氨基末端激酶(JNK)[2].本研究旨在检测斑蝥素和经典PP2A抑制剂冈田酸对JNK/Akt/FKHR通路的影响.一、材料与方法1.材料:胰腺癌细胞株CFPAC-1购自美国模式培养物保藏所.斑蝥素、冈田酸、JNK抑制剂SP600125购自Biomol公司.2.细胞培养:细胞维持于含10％胎牛血清的DMEM培养液中,于37℃5％CO2培养箱中培养.3.噻唑蓝比色法(MTT 法)检测细胞生长:细胞处理后,加MTT(Sigma公司)37℃孵育4h,加二甲基亚砜(DMSO)溶解甲臜.于490 nm波长测定吸光度.4.Western blot检测蛋白磷酸化水平:蛋白经电泳后转移到聚偏氟乙烯(PVDF)膜(Millipore公司),封闭后加入一抗,4℃孵育过夜.经二抗室温孵育后,用增强化学发光(ECL,Amersham公司)发光显示液检测.5.质粒构建及转染:组成型激活Akt(CA-Akt)表达质粒根据既往方法构建.用Lipofectamine 2000(Invitrogene公司)转染。