【摘 要】
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利用原核系统表达牛病毒性腹泻病毒(BVDV)E2蛋白,制备鼠源多克隆抗体.通过MDBK细胞增殖病毒,提取RNA,RT-PCR扩增E2全长基因,进行生物信息学分析后设计截短引物,构建优化表达
【基金项目】
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国家自然科学基金(批准号:31360620),甘肃农业大学学科建设专项基金(批准号:GSAU-XKJS-2018-075).
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利用原核系统表达牛病毒性腹泻病毒(BVDV)E2蛋白,制备鼠源多克隆抗体.通过MDBK细胞增殖病毒,提取RNA,RT-PCR扩增E2全长基因,进行生物信息学分析后设计截短引物,构建优化表达载体pET-30-E2,转化BL21,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达;用SDS-PAGE电泳分析蛋白表达,纯化蛋白联合弗氏佐剂免疫小鼠;用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定抗体效价水平,用免疫印迹(WB)和免疫荧光(IFA)法验证抗体特异性.结果表明:E2基因在大肠杆菌中成功表达,蛋白大小为
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