内质网滞留型抗CyclinD1胞内抗体在HeLa细胞中的表达分析

来源 :中国实验诊断学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:silent_snake
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目的 构建内质网滞留型的抗CyclinD1胞内抗体并鉴定其在肿瘤细胞中的表达活性。方法 利用PCR技术将细胞内质网滞留信号及E-tag检测标签引入抗CyclinD1人源单链抗体,获得抗CyclinD1胞内抗体(AD5E)基因片段,通过分子克隆技术,构建重组真核表达载体pcDNA3.1-AD5E,限制性内切酶分析及DNA测序验证其序列及读码框正确后,利用脂质体介导法转染HeLa细胞,RT-PCR和间接免疫荧光实验分析该胞内抗体在肿瘤细胞中的表达活性。结果 限制性内切酶分析及DNA测序发现,正确引入细胞内质网
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