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目的 采用大片段克隆策略对难测序铜绿假单胞菌噬菌体PaP1基因组进行克隆及测序。方法 用限制性内切酶Aat ⅡⅡ将噬菌体PaP1基因组DNA切成几个大片段,分别进行末端修饰后与线性化的大片段克隆载体pYLTAC7连接,将连接产物电转化感受态细胞,筛选阳性克隆进行测序。结果 AatⅡ将PaP1基因组切成8个片段,通过大片段克隆共获得3个阳性克隆,测出插入片段大小分别为9805、8335bp和3465bp,使该难测序基因组的测出量达到47757bp。结论 大片段克隆策略能够克服鸟枪法测序的不足,将有望获得噬菌