【摘 要】
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目的研究腺相关病毒载体介导的移植肝基因转移的可行性和转导率.方法以绿色荧光蛋白(GFP)作为报告基因,在大鼠供肝冷保存前经门静脉注入不同剂量(1×1010 pfu/ml、5×1010 pf
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目的研究腺相关病毒载体介导的移植肝基因转移的可行性和转导率.方法以绿色荧光蛋白(GFP)作为报告基因,在大鼠供肝冷保存前经门静脉注入不同剂量(1×1010 pfu/ml、5×1010 pfu/ml和1×1011 pfu/ml)的带有绿色荧光蛋白的腺相关病毒载体(AAV-GFP),保存后行异体肝移植,术后2、4及8周取供肝组织活检,运用免疫荧光显微镜和流式细胞仪检测GFP的表达,计算转导率,观察不同剂量的AAV-GFP及不同保存时间(1 h、4 h和10 h)对转导率的影响. 结果 3个剂量组肝移植术后第4周移植肝细胞内均可观察到GFP的表达,随着AAV-GFP剂量的增加,转导率也增加(6%、15%和34%);随着冷保存时间的延长, 转导率逐步提高(15%、32%和54%);除移植肝细胞外,脑、心、肺、肾、脾脏内均未见GFP 的表达;与对照组比较,移植肝功能的差异无显著性. 结论在模拟临床肝移植条件下,利用腺相关病毒可将目的基因转移入移植肝细胞内,且能高效表达;转导率随病毒剂量的增加、冷保存时间的延长而提高; 经冷保存途径腺相关病毒的转染具有嗜肝性;移植肝功能不受基因转导的影响.
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