【摘 要】
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本研究旨在通过慢病毒载体系统将猪源CD163转染入永生化的猪肺泡巨噬细胞(PAM)系(CRL-2843),建立稳定表达CD163的PAM细胞系(PAM-CD163)及验证该细胞系对PRRSV的易感性。用PCR
【机 构】
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西北农林科技大学动物医学院兽医免疫学研究所
【基金项目】
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国家自然科学基金（U0931003/L01、31101690）,国家高技术研究发展计划（863计划）（2011AA10A208-4）
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本研究旨在通过慢病毒载体系统将猪源CD163转染入永生化的猪肺泡巨噬细胞(PAM)系(CRL-2843),建立稳定表达CD163的PAM细胞系(PAM-CD163)及验证该细胞系对PRRSV的易感性。用PCR方法从pJET1.2-CD163载体上扩增CD163基因编码区,通过酶切连接构建慢病毒表达载体pTrip-CMV-CD163-IRESpur。将该质粒与慢病毒包装质粒psPAX2和pMD2.G共转染293-T细胞,包装表达CD163的慢病毒。将收获的慢病毒在Polybrene的介导下转导至永生化PAM细胞,采用嘌呤霉素筛选和细胞有限稀释法筛选出稳定表达CD163的PAM细胞系。应用得到的细胞系进行PRRSV感染试验。经过RT-PCR、间接免疫荧光试验、Western blot和流式细胞术试验证实,筛选出1株能稳定表达CD163的PAM细胞系,命名为PAM-CD163。该株细胞对PRRSV高度易感,PRRSV在PAM-CD163细胞上的毒价可以达到105.0 TCID50·mL-1以上。建立了稳定表达CD163的PAM细胞系,可以用于PRRSV的分离培养和细胞受体的研究。
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