【摘 要】
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目的 研究罗布麻总黄酮(TFF)对H2 O2诱导的人脐静脉融合细胞EA.hy926凋亡的保护作用,并探讨其可能的作用机制.方法 MTT法检测细胞存活率、凋亡检测试剂盒测定细胞凋亡率、Hoechst33342/PI荧光双染观察细胞形态变化,JC-1染色检测细胞线粒体膜电位的变化；Western blot检测凋亡相关蛋白Mcl-1、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9
【机 构】
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山西中医学院中药学院,山西太原030001 山西省中医药研究院,山西太原030012
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目的 研究罗布麻总黄酮(TFF)对H2 O2诱导的人脐静脉融合细胞EA.hy926凋亡的保护作用,并探讨其可能的作用机制.方法 MTT法检测细胞存活率、凋亡检测试剂盒测定细胞凋亡率、Hoechst33342/PI荧光双染观察细胞形态变化,JC-1染色检测细胞线粒体膜电位的变化；Western blot检测凋亡相关蛋白Mcl-1、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9及给药组与加抑制剂组AKT、GSK3β蛋白表达和磷酸化水平；荧光定量PCR检测各组GSK3β、Mcl-1、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9 mRNA的表达.结果 与对照组相比,模型组细胞存活率降低、凋亡率升高、线粒体膜电位降低,与模型组相比,TFF各剂量组(9 mg·L-1、18 mg·L-1、36 mg·L-1)细胞存活率明显增加(P＜0.05),线粒体膜电位升高(P＜0.05)；Western blot结果,与模型组相比,TFF各剂量组的Mcl-1蛋白表达升高,而cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白表达量降低(P＜0.05),与正常组相比,单独给药TFF各剂量组使通路中的AKT、GSK33磷酸化水平增高,而加PI3K抑制剂LY294002后,与给药组相比AKT及GSK3β磷酸化水平均降低(P＜0.05)；荧光定量PCR结果,与模型组相比,随着给药剂量的增加Mcl-1的mRNA表达逐渐增高,而cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、GSK3β的mRNA表达降低.结论 罗布麻总黄酮对H2O2诱导的EA.hy926细胞损伤有明显的保护作用,其主要作用机制可能是通过激活PI3K/AKT/GSK3β通路,增加AKT、GSK3β的磷酸化,减少Bcl-2家族抗凋亡蛋白Mcl-1的泛素化降解,进而抑制基于caspase家族的线粒体凋亡,发挥细胞保护作用.
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