【摘 要】
：
为了探究猪源IFN-λ3蛋白能否在CHO-S悬浮细胞中表达以及表达蛋白的抗口蹄疫病毒(FMDV)活性,根据NCBI上的猪源IFN-λ3序列,构建真核表达载体pcDNA3.4-IFNλ3-His,将其转染至CHO-K1贴壁细胞中,用间接免疫荧光试验和Western-blot验证重组质粒是否表达IFN-λ3蛋白.将pcDNA3.4-IFNλ3-His转染至CHO-S悬浮细胞中大量制备IFN-λ3蛋白,用AKTA蛋白纯化系统纯化蛋白,用SDS-PAGE和Western-blot方法鉴定纯化出的蛋白,用细胞毒性试
【机 构】
：
中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室,甘肃兰州 730046
论文部分内容阅读
为了探究猪源IFN-λ3蛋白能否在CHO-S悬浮细胞中表达以及表达蛋白的抗口蹄疫病毒(FMDV)活性,根据NCBI上的猪源IFN-λ3序列,构建真核表达载体pcDNA3.4-IFNλ3-His,将其转染至CHO-K1贴壁细胞中,用间接免疫荧光试验和Western-blot验证重组质粒是否表达IFN-λ3蛋白.将pcDNA3.4-IFNλ3-His转染至CHO-S悬浮细胞中大量制备IFN-λ3蛋白,用AKTA蛋白纯化系统纯化蛋白,用SDS-PAGE和Western-blot方法鉴定纯化出的蛋白,用细胞毒性试验分析纯化蛋白是否具有细胞毒性,用实时荧光定量PCR、Western-blot和空斑试验三种方法研究纯化蛋白的抗FMDV活性.结果显示,重组质粒pcDNA3.4-IFNλ3-His在CHO-K1细胞中瞬时表达IFN-λ3,在CHO-S细胞中以分泌形式表达IFN-λ3;用AKTA系统能够纯化出纯度较高的IFN-λ3蛋白;纯化出的IFN-λ3对PK-15细胞无明显毒性,能够抑制FMDVRNA的复制、减弱病毒蛋白翻译活动以及降低子代病毒的生成.本研究为发展新型FMDV防控策略提供了新方向.
其他文献
目的:研究亚临床甲状腺功能减退症(简称甲减)患者行左旋甲状腺素治疗的效果.方法:数据遴选本院2019年1月至2021年1月收治的110例亚临床甲减患者,采用“硬币分组法”分常规组(常规治疗,n=55)、研究组(左旋甲状腺素,n=55),比较两组疗效.结果:用药前两组患者的FT3、FT4、TSH水平差异无统计学意义(P>0.05),用药后两组患者的FT3、FT4水平均降低、TSH水平升高,且用药后研究组患者的FT3、FT4水平均低于常规组,TSH水平高于常规组,差异均具有统计学意义(P0.05),用药后两组
为建立快速鉴别蓝舌病病毒血清29型(BTV-29)的方法,根据BTV-29型毒株基因节段2(Seg-2)的序列特征,分别设计用于RT-PCR与qRT-PCR方法的特异性引物与TaqMan探针,通过试验确定其敏感性,用BTV-1～BTV-24等核酸作为对照评价其特异性.对BTV-29感染动物血液样本中的病毒核酸进行监测,并用BTV群特异qRT-PCR方法验证其可靠性.结果 显示,建立的BTV-29特异RT-PCR的灵敏度是1.12×102 copies/μL,而BTV-29特异qRT-PCR的灵敏度是1.1
目的:慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)患者行布地奈德联合特布他林压缩雾化吸入治疗的疗效观察.方法:选择2019年1月至2020年1月于本院接受治疗的100例女性AECOPD患者作为研究病例,参考随机动态数字表分别以对照组与研究组进行病例归纳,每组各包含50例患者;对照组疗法为布地奈德雾化吸入方案,研究组为布地奈德与特布他林雾化吸入方案,比对分析两组患者治疗前后的血气指标、肺功能指标以及治疗后的生活质量评分、6min步行距离.结果:治疗前两组患者的血气指标、肺功能指标均不存在明显差异(P>0.05
目的:分析在混合痔术后肛门坠胀患者治疗过程中使用补中益气汤加减治疗所取得的临床效果.方法:从在本院进行混合痔手术治疗且在术后发生肛门坠胀的患者中筛选出100例开展对比研究,患者入院时间为2018年1月至2021年1月,根据不同的治疗方法进行分组(50例/组),其中,对照组给予常规抗感染治疗,研究组在此之上添加补中益气汤加减治疗,比较两组的疗效差异.结果:研究组的治疗总有效率比对照组有显著的提升;治疗后,两组患者的生活质量评分均出现增长的现象,尤其是研究组比对照组增长更大;研究组对治疗的满意度也同样比对照组
为建立一种能检测血清中非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)抗体的阻断ELISA方法,本研究以真核表达后纯化的ASFV p30重组蛋白作为包被抗原,以特异性单抗作为阻断抗体,经条件优化、特异性试验和敏感性试验,建立了一种检测血清中ASFV抗体的阻断ELISA方法.结果 显示,纯化后的p30重组蛋白大小约为25 ku,建立的ASFV抗体阻断ELISA检测方法通过方阵试验优化后,最终确定了抗原最佳包被浓度为1 μg/mL,待检血清最佳稀释度为1∶2,最佳封闭液为5％ BS
目的:探析影响急性脑血管病(急性脑卒中)合并应激性溃疡的危险因素.方法:选择2016年7月1日至2020年6月30日康平县人民医院收治的2000例急性脑卒中患者的病例资料进行回顾性分析,分析患者的基本情况、疾病及治疗情况对急性脑血管病合并应激性溃疡发生率的影响.结果:急性血管病合并应激性溃疡发病率为5.60％,且急性脑血管病合并应激性溃疡患者死亡率高于无合并应激性溃疡患者(P<0.05).60岁以上发生率高于60岁以下,有高血压、糖尿病病史患者发生率均高于无上述病史者,脑出血发生率高于脑梗阻,GCS评分3
Dear Editor,rnThe emergence of COVID-19 since December 2019 has attracted great attention around the world and reminds the powerful pathogenic potential of viruses (Zhou et al.2020).The subfamily Orthocoronavirinae of the family Coronaviridae contains fou
目的:分析糖尿病肾病与慢性肾小球肾炎患者在进行血液透析过程中血钙、磷及甲状旁腺激素的变化.方法:筛选86例实施血液透析患者作为研究对象,均选自2019年5月至2021年5月,并按疾病类型分两组,对照组为慢性肾小球肾炎患者,观察组为糖尿病肾病患者,均实施血液透析治疗,对比两组检测结果、并发症率及甲状旁腺激素达标率.结果:透析前两组患者甲状旁腺激素、血磷、血钙水平差异均无统计学意义(P>0.05),透析后两组患者甲状旁腺激素、血钙降低,血磷水平升高(P0.05);观察组甲状旁腺激素达标19例,占比44.19％
目的:分析纳布啡用于疤痕子宫分娩镇痛试产的优点.方法:选取2018年1月至2020年1月100例医院收治瘢痕子宫产妇,随机分为两组.对照组采取舒芬太尼进行分娩镇痛试产,观察组则给予纳布啡进行分娩镇痛试产.比较两组产妇的镇痛效果以及不良反应发生情况.结果:观察组分娩结束时、产后1d、产后2d、产后3d时的VAS评分分别为(6.5±1.3)分、(7.6±1.5)分、(6.5±1.2)分、(3.2±0.6)分,对照组分娩结束时、产后1d、产后2d、产后3d时的VAS评分分别为(7.1±1.6)分、(8.3±1.
Dear Editor,rnHuman parechoviruses (HPeVs) are members of the Picornaviridae family and consist of a non-enveloped posi-tive-sense single-stranded RNA (+ ssRNA) (Kadambari et al.2019;Sridhar et al.2019).The Parechovirus genus is com-prised of six species,