目的 体外构建抗凋亡转录因子(AATF)-Che1重组蛋白原核表达载体pGEx-4T-1-AATF-Che1,优化pGEX-4T-1-AATF-Che1重组载体原核诱导表达条件,并获得可溶性的纯化谷胱甘肽巯基转移酶(GST)融合蛋白.方法 采用聚合酶链反应(PCR)法从pGEX-4T-1-AATF重组质粒扩增出AATF-Che1基因,将其与原核表达载体pGEX-4T-1双酶切后,回收目的基因片段.通过T4连接酶定向连接AATF-Che1基因和线性化原核表达载体pGEX-4T-1,获得重组蛋白AATF-Che1原核表达质粒pGEX-4T-1-AATF-Che1.将构建正确的表达质粒转化入大肠埃希菌感受态细胞BL21,并采用诱导剂异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白AATF-Che1的表达.考察不同诱导剂IPTG浓度、诱导时间和诱导温度对重组蛋白表达量及表达方式的影响,从而对诱导条件进行优化.采用谷胱甘肽琼脂糖凝胶珠对可溶形式的GST融合蛋白进行纯化,并采用Western蛋白免疫印记(WB)法鉴定获得的纯化蛋白.结果 原核表达质粒pGEX-4T-1-AATF-Che1的酶切、PCR鉴定结果及测序结果均正确;IPTG诱导蛋白在约65 kD处出现了1条新的蛋白条带,即AATF-Che1与GST的融合蛋白.不同的诱导时间及不同的IPTG浓度条件下,诱导融合蛋白的量均未见明显变化;37℃诱导时,重组蛋白主要以包涵体的形式存在于沉淀中,而16℃诱导时,融合蛋白可溶性地存在于上清液中.最终成功获得AATF-Che1可溶性纯化的融合蛋白,且WB法鉴定其抗原性良好.结论 体外成功构建AATF-Che1基因重组蛋白原核表达载体pGEX-4T-1-AATF-Che1,寻找到优化的重组载体原核诱导表达条件,并获得了大量可溶形式纯化的GST融合蛋白,为进一步研究AATF-Che1超家族基因在肿瘤中的作用奠定了基础。
AATF-Che1超家族基因原核表达及其融合蛋白纯化
【摘 要】
：
目的 体外构建抗凋亡转录因子(AATF)-Che1重组蛋白原核表达载体pGEx-4T-1-AATF-Che1,优化pGEX-4T-1-AATF-Che1重组载体原核诱导表达条件,并获得可溶性的纯化谷胱甘肽巯基转移酶(GST)融合蛋白.方法 采用聚合酶链反应(PCR)法从pGEX-4T-1-AATF重组质粒扩增出AATF-Che1基因,将其与原核表达载体pGEX-4T-1双酶切后,回收目的基因片段.
【机 构】
：
221002江苏省徐州医学院附属医院血液科,221002江苏省徐州医学院附属医院血液科,221002江苏省徐州医学院附属医院血液科,221002江苏省徐州医学院附属医院血液科,221002江苏省徐州医
【出 处】
：
国际输血及血液学杂志
【发表日期】
：
2014年37期
论文部分内容阅读
其他文献
目的 比较mFOLFOX6方案与奥沙利铂联合替吉奥治疗胃癌肝转移患者的疗效及其对患者免疫功能的影响.方法 选择2014年1月-2016年1月收治的134例胃癌肝转移患者作为研究对象,采用
为探索解决抗精神病药物而引起的便秘,将60例用药后出现便秘的女精神分裂症患者随机分为2组,对照组(30人)采用常规方法,实验组(30人)采用常规+仰卧起坐进行便秘的预防治疗.实验显示:实验组疗效明显高于对照组(P＜0.05).实验组疗效高达96.7%,而对照组仅为33.3%.提示仰卧起坐对预防并缓解抗精神病药物引起的便秘有一定的疗效。
目的 探讨广西瑶族人群血小板膜糖蛋白(GP)Ⅰ bα人类血小板抗原(HPA)-2基因多态性及其临床意义.方法 2009年3月至2010年5月,选择广西瑶族健康成年人883例为研究对象,采集其血液样本,采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)法对其HPA基因分型进行检测.采集样本前均经受试对象本人的知情同意,并与之签订临床研究知情同意书.结果 本组883份血液样本中,HPA-2a/2a,H
氧气吸入是老年病人常用的治疗方法,我科每个病房有2张病床,中心供氧接头只有一个,如果两个病人同时吸氧,护士操作时不太方便,因为Y型玻璃接管的三个接口都比较粗,很难与橡胶管进行快速连接,并且氧气流量也不好控制.为此,利用静脉输液中使用后的三通,稍加改进后代替Y型玻璃接管,应用于氧气吸入治疗中,取得了很好的效果。
细胞移植技术治疗周围神经损伤已成为新兴的组织工程学研究热点。骨髓间充质干细胞(BMSCs)，由于其具有扩增快、便于分离提纯、可以体外诱导分化成为雪旺细胞(SC)的特性，有可能成为雪旺细胞的有效替代品和组织T程化神经的新型种子细胞。就种子细胞雪旺细胞和骨髓间充质干细胞的生理功能、生物学特性、体外诱导骨髓间充质干细胞生成雪旺细胞的方法以及研究前景作一综述。
目的 比较腹腔镜与开腹手术对70岁以上老年结直肠癌患者的近期疗效,并评价腹腔镜手术的安全性和可行性.方法 回顾分析2009年1月-2015年12月仪征市人民医院普外科收治的91例行
目的 回顾21例腹部手术后肠外瘘的病因、治疗和预后情况,探讨腹部手术后肠外瘘的临床治疗方法.方法 收集新疆维吾尔自治区人民医院胃肠外科2013年8月-2016年8月期间收治的腹
静脉输液是治疗、抢救患者的一项重要措施,对于病情急、危、重的脑外科患者,选择一种安全、有效的输液途径尤为重要.目前,该院已对脑外伤患者广泛开展浅静脉留置针输液,取得满意效果,现报告如下。
目的 探讨佛山地区志愿无偿献血人群的人类免疫缺陷病毒(HIV)感染情况,为完善本地区血液安全策略提供参考依据.方法 选取2001年1月至2013年12月于佛山地区采供血机构献血的538 107例志愿无偿献血者作为研究对象.对其血液标本进行HIV检测,对HIV感染的流行变化趋势,HIV感染者的检出情况及流行病学资料进行统计学分析.血样HIV抗体筛查检测采用酶联免疫吸附法(ELISA),呈阳性的血样采