美洲大蠊提取物CII-3调控SIRT1/mTOR信号通路诱导白血病K562细胞衰老

来源 :中国中药杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:stanley45518501
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该研究旨在探讨沉默信息调节因子2相关酶1(slient mating type information regulation 2 homolog 1,SIRT1)/结节性硬化症复合物Ⅱ(tuberous sclerosis complex 2,TSC2)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路在美洲大蠊提取物CII-3诱导人白血病细胞K562细胞衰老中的作用。体外培养K562细胞,设对照组(0 μg·mL-1)及美洲大蠊提取物CII-3不同剂量组(5、10、20、40、80、160 μg·mL-1),细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测CII-3对K562细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测CII-3对K562细胞周期分布的影响;β-半乳糖苷酶染色试剂盒(senescence-associated β-galactosidase stain kit, SA-β-gal)检测衰老细胞染色阳性百分率;流式细胞术检测线粒体膜电位的改变;荧光定量PCR检测端粒酶逆转录酶(telomerase reverse transcriptase,TERT)的表达;荧光定量PCR和免疫印迹法(Western blot)检测SIRT1、TSC2和mTOR mRNA及蛋白的表达。结果显示,经美洲大蠊提取物CII-3诱导作用后,CII-3组细胞增殖抑制率高于对照组,当CII-3质量浓度为80 μg·mL-1,作用时间为72 h时,CII-3对K562细胞的增殖抑制率最高,故选为实验标准进行后续研究。与对照组相比,CII-3组阻滞在G0/G1的细胞比例升高,S期细胞比例降低;细胞SA-β-Gal衰老染色阳性率升高;线粒体膜电位降低;端粒酶TERT mRNA表达下调;SIRT1和TSC2 mRNA的表达下调,mTOR mRNA的表达上调;SIRT1和p-TSC2蛋白的表达下调,p-mTOR蛋白的表达上调。以上研究结果表明,美洲大蠊提取物CII-3可通过SIRT1/mTOR信号通路诱导K562细胞衰老。
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