【摘 要】
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目的 探讨具有最大转染效率和沉默效应时壳聚糖-小干扰RNA (siRNA)的壳聚糖与siRNA(NP)比值.方法 用激光粒度仪测定壳聚糖-siRNA纳米颗粒的直径和Zeta电位.荧光标记的siRNA转染到C6细胞并初步鉴定转染效率.分6组进行转染:分别加入不同NP比值的壳聚糖-siRNA(实验组)、LipofectamineTM 2000和多药耐药相关蛋白1(MRPl) siRNA(阳性对照组)、
【机 构】
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目的 探讨具有最大转染效率和沉默效应时壳聚糖-小干扰RNA (siRNA)的壳聚糖与siRNA(NP)比值.方法 用激光粒度仪测定壳聚糖-siRNA纳米颗粒的直径和Zeta电位.荧光标记的siRNA转染到C6细胞并初步鉴定转染效率.分6组进行转染:分别加入不同NP比值的壳聚糖-siRNA(实验组)、LipofectamineTM 2000和多药耐药相关蛋白1(MRPl) siRNA(阳性对照组)、壳聚糖-阴性对照siRNA纳米粒(阴性对照组)和空白壳聚糖纳米粒(空白组),采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测MRPl mRNA和蛋白水平的表达.结果 成功制备了壳聚糖-siRNA纳米粒的直径和电位分别是186.7 nm和18.57 mV、209.5 nm和13.52 mV、492.3 nm和48.58 mV.其中NP比值为175时纳米颗粒对目的蛋白的表达量可以下调到(23.2±4.3)％.结论 壳聚糖-siRNA的NP比值为175时可以有效抑制MRP1基因和蛋白的表达。
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