【摘 要】
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目的 探讨小干扰RNA(siRNA)沉默肾上腺髓质素(ADM)基因对黑素瘤细胞系A375增殖和凋亡的影响.方法 实时荧光定量-PCR(qRT-PCR)检测干扰效果,并选出干扰效果最好的siRNA.用筛选出的最有效siRNA转染A375细胞为实验组；转染非特异序列的细胞为阴性对照组,未转染的细胞为空白对照组.免疫细胞化学法蛋白水平检测干扰效果；噻唑蓝法(MTT)分别测定沉默ADM基因24、48 h后
【机 构】
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目的 探讨小干扰RNA(siRNA)沉默肾上腺髓质素(ADM)基因对黑素瘤细胞系A375增殖和凋亡的影响.方法 实时荧光定量-PCR(qRT-PCR)检测干扰效果,并选出干扰效果最好的siRNA.用筛选出的最有效siRNA转染A375细胞为实验组；转染非特异序列的细胞为阴性对照组,未转染的细胞为空白对照组.免疫细胞化学法蛋白水平检测干扰效果；噻唑蓝法(MTT)分别测定沉默ADM基因24、48 h后A375细胞增殖的变化；流式细胞仪(FCM)检测干扰ADM基因48 h后A375细胞的凋亡情况.结果 qRT-PCR显示ADM-siRNA-2干扰效果最好.免疫细胞化学结果显示转染ADM-siRNA-2后ADM蛋白的表达显著低于未转染组和阴性对照组.MTT结果显示,转染ADM-siRNA-2的细胞24、48 h吸光度A值为0.389±0.0375,0.469±0.0330,低于空白对照组(0.574±0.0733、0.685±0.0154)和阴性对照组(0.548±0.0376、0.676±0.0374),差异均有统计学意义(P值均＜0.05),空白对照组和阴性对照组比较,差异无统计学意义(P值均＞ 0.05).FCM检测显示转染ADM-siRNA-2组的细胞早期凋亡率为(20.200±6.046)％,高于空白对照组(1.667±0.340)％和阴性对照组(4.587±1.294)％,差异有统计学意义(P值均＜0.05),空白对照组和阴性对照组比较,差异无统计学意义(P值均＞ 0.05).结论 siRNA沉默ADM基因对A375增殖有抑制作用；而对凋亡则有明显促进作用。
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