【摘 要】
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目的表达沙眼衣原体pORF8质粒蛋白,制备其单克隆抗体(mAb),并鉴定mAbs的生物学特征。方法克隆表达pORF8融合蛋白并免疫小鼠,制备致敏脾淋巴细胞。取脾淋巴细胞与骨髓瘤细胞SP
【机 构】
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南华大学病原生物学研究所,南华大学第一附属医院,德州大学圣安东尼奥健康科学研究中心,
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目的表达沙眼衣原体pORF8质粒蛋白,制备其单克隆抗体(mAb),并鉴定mAbs的生物学特征。方法克隆表达pORF8融合蛋白并免疫小鼠,制备致敏脾淋巴细胞。取脾淋巴细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,建立杂交瘤细胞株;间接免疫荧光试验(IFA)筛选稳定分泌抗pORF8蛋白mAbs的阳性细胞株并鉴定mAbs类型;ELISA法测定mAbs效价;IFA、Western blot鉴定mAbs特异性。结果筛选出3株稳定分泌特异性抗pORF8mAb的杂交瘤细胞株,分别为12C7、5C2、12F8,抗体类型分别为IgM、IgG3、IgG3;杂交瘤细胞培养上清的抗体效价分别为1︰2 048、1︰512、1︰1 024。12C7、12F8mAbs能同时特异性识别GST-pORF8、RFP-pORF8融合蛋白,5C2仅识别GST-pORF8融合蛋白,而不识别RFP-pORF8融合蛋白。结论成功获得了3株分泌pORF8mAb的杂交瘤细胞株,为研究pORF8质粒蛋白结构和功能及建立特异敏感的沙眼衣原体检测方法奠定了基础。
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