探讨丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(MAPK/ERK)特异性抑制剂PD98059对结核杆菌低分子多肽抗原(Mtb-Ag)活化γδΤ细胞的影响。
方法分离获取健康人外周血单个核细胞(PBMC),分别使用佛波醇酯+离子霉素(PMA+IM)、Mtb-Ag刺激PBMC,流式细胞术检测处理0、6、12、24、48和72 h后γδΤ细胞CD69的表达。浓度为0、1、10和100 μmol/L的PD98059预处理PBMC后再分别加入Mtb-Ag(Mtb-Ag组)、PMA+IM(PMA+IM组)处理24 h,流式细胞术检测活化γδΤ细胞CD69的表达;Mtb-Ag组继续培养10 d后收集细胞计数细胞总数、检测γδΤ细胞比例并计算γδΤ细胞的绝对数量。
结果使用PMA+IM处理6 h,γδΤ细胞CD69表达达高峰;使用Mtb-Ag处理24 h,γδΤ细胞CD69表达达高峰。处理后同一时点两组γδΤ细胞CD69表达比较,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。使用终浓度分别为0、1、10和100 μmol/L的PD98059预处理PBMC后再分别加入Mtb-Ag、PMA+IM处理24 h,流式细胞术检测显示Mtb-Ag组γδΤ细胞CD69表达分别为(79.0±0.8)%、(75.0±0.7)%、(54.0±0.5)%和(17.0±0.2)%,而PMA+IM组γδΤ细胞CD69表达均在98%以上;Mtb-Ag组继续培养10 d后,细胞总数由培养前的1.5×106分别增殖到(10.3±2.5)×106、(9.5±2.1)×106、(5.8±1.8)×106和(2.1±0.5)×106,γδΤ细胞数分别增殖到(6.2±0.9)×106、(5.0±0.8)×106、(2.1±0.5)×106和(0.4±0.1)×106。
结论Mtb-Ag可以通过MAPK/ERK信号转导通路特异性活化γδΤ细胞。