Tat-GFP融合蛋白的表达纯化及其穿膜活性

来源 :吉林大学学报：医学版 | 被引量 : 0次 | 上传用户：Robert_1967

【摘要】

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目的：获得具备穿膜活性与绿色荧光蛋白（GFP）标记的Tat-GFP融合蛋白,探讨Tat-GFP在MCF-7细胞中的跨膜转运特性。方法：应用pET-24a-Tat-GFP质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,检测不

【作者】

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关新刚苏维恒于欣佟海滨孙新

【机构】

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北华大学生命科学研究中心,吉林大学生命科学学院艾滋病疫苗国家工程实验室,东北师范大学附属中学高中部生物组

【出处】

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吉林大学学报：医学版

【发表日期】

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2014年4期

【关键词】

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Tat-GFP 细胞穿膜肽融合蛋白穿膜活性 Tat-GFP cell-penetrating peptidesfusion protein penetrat

【基金项目】

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国家自然科学基金资助课题（81150015）, 吉林省科技厅科技发展计划项目资助课题（20111809）, 吉林省吉林市科技局科技发展计划项目资助课题（201233126）

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目的：获得具备穿膜活性与绿色荧光蛋白（GFP）标记的Tat-GFP融合蛋白,探讨Tat-GFP在MCF-7细胞中的跨膜转运特性。方法：应用pET-24a-Tat-GFP质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,检测不同异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）浓度（0.5和1.0mmol·L^-1）和不同温度（22℃和37℃）诱导融合蛋白的表达情况;利用Ni-IDA树脂亲和纯化Tat-GFP蛋白,利用GFP特异性抗体采用Western blotting法分析洗脱液中的蛋白;激光共聚焦荧光显微镜下检测Tat-GFP

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