【摘 要】
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目的制备弓形虫肌动蛋白(actin)的多克隆抗体并纯化。方法以弓形虫cDNA链为模板PCR扩增1 131bp actin基因,亚克隆至pET30a载体后转化入大肠埃希菌BL21中,用1mmol/L IPTG诱导
【机 构】
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新乡医学院寄生虫学教研室,新乡医学院药理学教研室,中山大学中山医学院寄生虫学教研室,
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目的制备弓形虫肌动蛋白(actin)的多克隆抗体并纯化。方法以弓形虫cDNA链为模板PCR扩增1 131bp actin基因,亚克隆至pET30a载体后转化入大肠埃希菌BL21中,用1mmol/L IPTG诱导表达actin-His6蛋白,采用亲和层析法纯化;取200μg纯化蛋白加等量佐剂混合,免疫SD大鼠4次,收集抗血清,用亲和纯化柱纯化。结果 PCR扩增出actin基因并成功构建actin/pET30a/BL21表达系统,获得actin-His6蛋白,制备的大鼠源性actin-His6蛋白多克隆抗体纯化后为单一蛋白抗体。结论制备并纯化了抗弓形虫actin的多克隆抗体,为弓形虫入侵机制的研究奠定了基础。
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