论文部分内容阅读
[摘 要]目的建立红穿破石中大黄素含量的高效液相色谱测定方法。方法选用Eclipse XDB-C18色谱柱（4.6mm×150mm，5μm），以甲醇-0.1%磷酸溶液（75∶25）为流动相，检测波长为285nm。结果大黄素在0.0063～0.063μg范围内呈良好的线性关系（r=0.999 9），平均回收率为102.0%，RSD=1.58%（n=6）。结论本法简便，准确，可用于红穿破石中大黄素的含量测定。
[关键词]红穿破石 大黄素 测定
中图分类号：R284 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）01-0268-01
红穿破石为鼠李科植物翼核果Ventilago leiocarpa Benth.的干燥根和老茎，主产于广西等地，具有清热利湿、利尿通淋的作用，特别是对消石具有特殊功效，民间常用于尿路感染、急慢性肾炎、肾结石的治疗，现已有多个制药厂家把它作为治疗结石症的重要组方。王氏等[2]报道，从广西产红穿破石根和茎中分离到大黄素、大黄素甲醚、1，2，4，8-四羟基-3-甲基蒽醌、翼核果醌-Ⅰ、翼核果素，其中大黄素为该植物的主要化学成分。有关红穿破石的主成分含量测定尚未见报道。本试验采用HPLC法对红穿破石中大黄素进行含量测定，为药材生产和质量标准提供科学依据。
一 仪器与试药
美国Agilent1100系列高效液相色谱仪（包括四元泵，自动进样器，脱气机，紫外可见检测器，柱温箱和Agilent1100化学工作站），BUG40型超声波清洗器（上海必能信有限公司）。
大黄素对照品（批号110756-200110，含量测定用）由中国药品生物制品检定所提供，纯度在98%以上；红穿破石由广西玉林制药有限责任公司提供，来源于广西各地，经广西玉林制药有限责任公司中药鉴定室专家鉴定。水为重蒸馏水，甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
二 方法与结果
1 色谱条件
Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱（4.6mm×150mm，5μm）；流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液（75∶25）；流速：1.0mL/min；检测波长：285nm；柱温：30℃；进样量：10μL。理論板数按大黄素计算应不低于3000。在此色谱条件下，红穿破石样品能够达到基线分离。
2 对照品溶液的制备
精密称取大黄素对照品适量，加甲醇制成每1mL含大黄素6.3μg的溶液，作为对照品溶液。
3 供试品溶液的制备
取红穿破石粉末适量，取0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，超声30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，作为供试品溶液。
4 线性关系的考察
分别精密吸取大黄素对照品溶液（6.3μg/mL）1、2、4、6、8、10 mL，置于10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，各进样10μL，连续进样2次，测定峰面积。以对照品进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=4172.28A+0.46，r=0.9999，结果表明，大黄素在0.0063～0.063μg范围内呈良好的线性关系。
5 精密度试验
取大黄素对照品溶液，各重复进样6次，测定峰面积，结果大黄素峰面积值为265.8、268.5、265.8、268.3、267.9、267.7，RSD=0.4%。表明具有较好的精密度。
6 重现性试验
取同一批的样品6份，按“3”项下方法制备供试品溶液，测定大黄素峰面积，结果为222.2、223.9、222.0、225.2、223.7、222.6，RSD=0.5%。表明该法重现性良好。
7 稳定性试验
取同一供试品溶液，分别于配制后0、4、8、12 h，依法测定峰面积，结果RSD=0.25%，表明样品溶液在12h内基本稳定。
8 加样回收率试验
取已知大黄素含量的红穿破石粉末约0.2 g，平行称取6份，分别精密称定，各加入一定量的大黄素对照品，按“3”项下方法制备供试品溶液，在所确定的HPLC条件下进行测定。按上述色谱条件测定峰面积，计算回收率。结果大黄素的平均加样回收率为102.0%，RSD=1.58%，说明该方法准确可靠。
9 样品测定
取红穿破石样品，按“3”项下方法操作，在上述色谱条件下进行含量测定。
三 讨论
大黄素标准品在紫外分光光度计扫描下，最大吸收波长为225、285、435 nm，在选定的流动相下，其中波长为285nm时，大黄素的峰最高，附近没有杂质峰，基线平稳。故选定285nm为检测波长。本试验首次采用HPLC法对广西产道地药材红穿破石的主成分大黄素进行含量测定。大黄素具有抗炎、抑菌、利尿、利胆等药理作用，这进一步证实民间常用于尿路感染、急慢性肾炎、肾结石的治疗是有一定道理的。本试验仅考察广西等10个地区的红穿破石，且不同产地的红穿破石的大黄素含量差异较大，桂林产的红穿破石的大黄素含量最高，同一株植物根的含量最大，约为茎的2倍。这些差异可能是由药材的产地、生长环境、采收期不同等原因造成。
参考文献
[1] 黄维安，蒙毅，范卫锋，HPLC法测定红穿破石中大黄素的含量[S].论文网，2011.05.
[2] 王血芬，卢文杰，陈家源，等.翼核果化学成分的研究[J].药学学报， 1993，28（2）：122-125.
[3] 王虎，陈华庭，徐楚鸿.肾衰丸中大黄素的含量测定[J].中国医院药学杂志，2005，25（9）：833-835.
[关键词]红穿破石 大黄素 测定
中图分类号：R284 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）01-0268-01
红穿破石为鼠李科植物翼核果Ventilago leiocarpa Benth.的干燥根和老茎，主产于广西等地，具有清热利湿、利尿通淋的作用，特别是对消石具有特殊功效，民间常用于尿路感染、急慢性肾炎、肾结石的治疗，现已有多个制药厂家把它作为治疗结石症的重要组方。王氏等[2]报道，从广西产红穿破石根和茎中分离到大黄素、大黄素甲醚、1，2，4，8-四羟基-3-甲基蒽醌、翼核果醌-Ⅰ、翼核果素，其中大黄素为该植物的主要化学成分。有关红穿破石的主成分含量测定尚未见报道。本试验采用HPLC法对红穿破石中大黄素进行含量测定，为药材生产和质量标准提供科学依据。
一 仪器与试药
美国Agilent1100系列高效液相色谱仪（包括四元泵，自动进样器，脱气机，紫外可见检测器，柱温箱和Agilent1100化学工作站），BUG40型超声波清洗器（上海必能信有限公司）。
大黄素对照品（批号110756-200110，含量测定用）由中国药品生物制品检定所提供，纯度在98%以上；红穿破石由广西玉林制药有限责任公司提供，来源于广西各地，经广西玉林制药有限责任公司中药鉴定室专家鉴定。水为重蒸馏水，甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
二 方法与结果
1 色谱条件
Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱（4.6mm×150mm，5μm）；流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液（75∶25）；流速：1.0mL/min；检测波长：285nm；柱温：30℃；进样量：10μL。理論板数按大黄素计算应不低于3000。在此色谱条件下，红穿破石样品能够达到基线分离。
2 对照品溶液的制备
精密称取大黄素对照品适量，加甲醇制成每1mL含大黄素6.3μg的溶液，作为对照品溶液。
3 供试品溶液的制备
取红穿破石粉末适量，取0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，超声30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，作为供试品溶液。
4 线性关系的考察
分别精密吸取大黄素对照品溶液（6.3μg/mL）1、2、4、6、8、10 mL，置于10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，各进样10μL，连续进样2次，测定峰面积。以对照品进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=4172.28A+0.46，r=0.9999，结果表明，大黄素在0.0063～0.063μg范围内呈良好的线性关系。
5 精密度试验
取大黄素对照品溶液，各重复进样6次，测定峰面积，结果大黄素峰面积值为265.8、268.5、265.8、268.3、267.9、267.7，RSD=0.4%。表明具有较好的精密度。
6 重现性试验
取同一批的样品6份，按“3”项下方法制备供试品溶液，测定大黄素峰面积，结果为222.2、223.9、222.0、225.2、223.7、222.6，RSD=0.5%。表明该法重现性良好。
7 稳定性试验
取同一供试品溶液，分别于配制后0、4、8、12 h，依法测定峰面积，结果RSD=0.25%，表明样品溶液在12h内基本稳定。
8 加样回收率试验
取已知大黄素含量的红穿破石粉末约0.2 g，平行称取6份，分别精密称定，各加入一定量的大黄素对照品，按“3”项下方法制备供试品溶液，在所确定的HPLC条件下进行测定。按上述色谱条件测定峰面积，计算回收率。结果大黄素的平均加样回收率为102.0%，RSD=1.58%，说明该方法准确可靠。
9 样品测定
取红穿破石样品，按“3”项下方法操作，在上述色谱条件下进行含量测定。
三 讨论
大黄素标准品在紫外分光光度计扫描下，最大吸收波长为225、285、435 nm，在选定的流动相下，其中波长为285nm时，大黄素的峰最高，附近没有杂质峰，基线平稳。故选定285nm为检测波长。本试验首次采用HPLC法对广西产道地药材红穿破石的主成分大黄素进行含量测定。大黄素具有抗炎、抑菌、利尿、利胆等药理作用，这进一步证实民间常用于尿路感染、急慢性肾炎、肾结石的治疗是有一定道理的。本试验仅考察广西等10个地区的红穿破石，且不同产地的红穿破石的大黄素含量差异较大，桂林产的红穿破石的大黄素含量最高，同一株植物根的含量最大，约为茎的2倍。这些差异可能是由药材的产地、生长环境、采收期不同等原因造成。
参考文献
[1] 黄维安，蒙毅，范卫锋，HPLC法测定红穿破石中大黄素的含量[S].论文网，2011.05.
[2] 王血芬，卢文杰，陈家源，等.翼核果化学成分的研究[J].药学学报， 1993，28（2）：122-125.
[3] 王虎，陈华庭，徐楚鸿.肾衰丸中大黄素的含量测定[J].中国医院药学杂志，2005，25（9）：833-835.