探讨喜树碱对HaCaT细胞自噬的影响。
方法将HaCaT细胞分为对照组和实验组,对照组用0.1%二甲基亚砜处理,实验组分别用5、10、25、50、100、200 nmol/L浓度的喜树碱处理。不同浓度喜树碱作用于HaCaT细胞24、48 h,用CCK8法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测药物作用24 h后细胞凋亡情况,免疫印迹法检测自噬相关微管相关蛋白1轻链3(LC3)、p62的变化;选取10 nmol/L喜树碱作用于HaCaT细胞24 h,间接免疫荧光法检测细胞自噬蛋白LC3的变化。
结果5、10 nmol/L喜树碱对HaCaT细胞增殖、凋亡无显著影响,50、100、200 nmol/L喜树碱作用HaCaT细胞24 h,增殖抑制率分别为(31.23 ± 1.00)%,(54.21 ± 8.10)%,(66.75 ± 10.70)%;25、50、100、200 nmol/L喜树碱作用HaCaT细胞48 h,增殖抑制率分别为(25.81 ± 5.99)%、(44.35 ± 5.32)%、(65.81 ± 8.28)%、(73.23 ± 9.59)%,与同时段对照组相比,差异有统计学意义(均P < 0.001)。50、100、200 nmol/L喜树碱作用HaCaT细胞24 h,凋亡率分别为(14.46 ± 2.38)%、(19.15 ± 1.59)%、(29.88 ± 1.37)%,与对照组(3.80 ± 0.13)%比较,差异有统计学意义(均P < 0.001)。5、10 nmol/L喜树碱处理HaCaT细胞24 h后,LC3Ⅱ表达上调,p62蛋白表达下调。间接免疫荧光显示10 nmol/L喜树碱作用HaCaT细胞24 h后,实验组与对照组自噬体阳性细胞百分率分别为(36.67 ± 4.55)%、(6.23 ± 0.92)%,两组差异有统计学意义(t= 6.546,P= 0.003)。
结论5、10 nmol/L喜树碱可诱导HaCaT细胞发生自噬,但对细胞增殖、凋亡无影响。50、100、200 nmol/L喜树碱抑制HaCaT细胞增殖,促使细胞发生凋亡,自噬水平降低。