【摘 要】
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试验构建了瘤胃总甲烷菌实时荧光绝对定量PCR的标准品及标准曲线用于总甲烷菌的定量测定。并提取瘤胃微生物总DNA，以甲烷菌特异性引物进行PCR扩增，回收纯化PCR产物，与pBS—T载体
【机 构】
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内蒙古农牧业科学院生物中心,日本国家农业生物资源研究所动物科学研究组
【基金项目】
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基金项目：中日合作项目“关于中国·亚洲东部区域反刍家畜生产状况利用及甲烷排放量的研究”
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试验构建了瘤胃总甲烷菌实时荧光绝对定量PCR的标准品及标准曲线用于总甲烷菌的定量测定。并提取瘤胃微生物总DNA，以甲烷菌特异性引物进行PCR扩增，回收纯化PCR产物，与pBS—T载体连接并转化到大肠杆菌，再用氨苄西林培养基筛选阳性重组质粒，提取含目的片段质粒DNA，通过PCR及测序鉴定重组质粒。根据OD值确定浓度，将梯度稀释的质粒作为模板，进行荧光定量PCR反应并作出标准曲线。结果表明：所构建的标准曲线具有很高的相关性（R^2=0．992），并获得了高扩增效率产物。
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