【摘 要】
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目的获得Asp-Asp-Asp-Asp-Lys序列＋牛EKL的cDNA序列,实现EKL基因在大肠杆菌中的融合表达和自切割。方法用Trizol法从牛十二指肠组织中提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增其cDNA片段
【机 构】
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吉林大学再生医学科学研究所生物技术药物教研室,吉林大学中日联谊医院骨科
【基金项目】
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吉林省科技发展计划项目(20060564)
论文部分内容阅读
目的获得Asp-Asp-Asp-Asp-Lys序列＋牛EKL的cDNA序列,实现EKL基因在大肠杆菌中的融合表达和自切割。方法用Trizol法从牛十二指肠组织中提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增其cDNA片段,将此片段克隆于表达载体pGEX-2T,并在其前引入肠激酶（EK）识别序列。结果所表达蛋白经SDS-PAGE分析,相对分子质量约为61 000,经GST-Sepharose亲和色谱柱纯化后得到单一蛋白,SDS-PAGE显示单一条带,用微量EK引发自切割,切断GST标签蛋白和Asp-Asp-Asp-
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