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【文章编号】1004-7484（2014）05-3383-01
梅毒是由苍白（梅毒）螺旋体引起的慢性、系统性性传播疾病。主要通过性途径传播，临床上可表现为一期梅毒、二期梅毒、三期梅毒、潜伏梅毒和先天梅毒（胎传梅毒）等。是《中华人民共和国传染病防治法》中，列为乙类防治管理的病种。可以侵犯皮肤、粘膜及其他多种组织器官，可有多种多样的临床表现，病程中有时呈无症状的潜伏状态。病原体可以通过胎盘传染给胎儿而发生胎儿传染，患有梅毒的孕妇可通过胎盘传染给胎儿，引起胎儿宫内感染，可导致流产、早产、死胎或分娩胎传梅毒给胎儿。目前，酶联免疫（ELISA）法作为新型的梅毒检查手段，以其价格低廉、操作简便、适合大样本量的同时检测越来越受到临床检验的重视
本实验室采用中山生物工程有限公司，梅毒螺旋抗体诊断试剂量盒。原理：
本试剂盒采用双抗原夹心法检测人血清或血浆中的梅毒螺旋体抗体。首先将纯化的TP抗原包被到聚苯乙烯微孔，并保持其活性。在测定时，TP抗原将与标本中的TP抗体特异性结合，形成抗原-抗体复合物，用洗涤的方法使形成的复合物与其他物质分开。然后加入辣根过氧化物酶标记TP抗原，酶标记的TP抗原与TP抗体特异性结合，最终形成抗原-抗体-酶标记复合物，用洗涤的方法使形成的复合物与其它物质分开，最后结合在固相载体上的辣根过氧化物酶的量与标本中的受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中的受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，最后根据颜色反应的深浅够判断受检样本中是否有TP抗体。
检验方法：
1试剂准备：将浓缩洗涤液1瓶加入750ML蒸馏水中混匀备用；
2取出包被板，设空白对照2孔加100ML洗涤液，另设阴性对照和阳性对照各2孔，分别加入50UL阴、阳性对照血清，其余孔加入50UL待检样品，覆封板胶后，置37C温育60分钟：
3洗板：用洗涤液洗板5次，每次静置1分钟，扣干；
4每孔加酶结合物50 UL（空白对照不加），充分混匀，覆封板胶后，置37C温育30分钟。
5去孔内液体，用洗涤液洗板5次，每次静止1分钟后甩干；
6每孔加入底物A、B液各50UL，37C避光显色30分钟后加终止液50UL/孔。
7测定：于450NM波长测吸光度（A）值。
注意事项
1本试剂盒仅用于体外诊断，操作应严格按照说明书进行，防止交叉污染
2用前试剂盒应在室温中平衡后再封启用，不同批号试剂请勿混用
3 未用完的的包被板应及时密封存。ELISA检测梅毒螺旋体抗体是1种敏感性高、特异性强、重复性好的实验诊斷方法，但在实际操作中的影响因素较多，现就比较常见的影响因素作一些探讨：
标本溶血
ELISA法可将反应孔对溶血血清中的血红蛋白的非特异性吸附。Hb具有类过氧化酶活性，其作用与辣根过氧化物酶类似，如果反应孔非特异吸附Hb而残留，则可催化底物显色，使本底吸光度值升高甚至造成假阳性。
标本污染
标本的污染菌体有些含有辣根过氧化物酶，可会使实验出现非特异性显色干扰。致假阳性结果产生。
标本在冰箱中保存过久
血清中IgG可聚合成多聚体，在用本间接法测定中会导致本底过深，甚至造成假阳性。
标本冰冻保存反复冻融
标本中的蛋白等分子可被冰冻保存反复冻融产生械剪切力破坏作用，可致假阳性结果。
当血清标本凝固不全时其中含有部分纤维蛋白原析中，在洗板时，纤维蛋白原析吸附在板孔处，堵塞洗板机针头，酶清洗残留，使其显色，致假阳性。
洗板过程中，如强阳性标本，外溢到附近阴性标本，致其假阳性，如果洗板次数过少，或洗涤时间过短，均可造成假阳性。
结论梅毒ELISA试验对梅毒的诊断有很大的价值，但它存在着一定的假阳性和假阴性情况，其结果一定要结合病史和临床、体格检查综合分析考虑。在实际操作的过程中，严格认真操作避免或减少影响因素， 加强质量管理，才能保证血液检测质量，为临床提供辅住诊断。
梅毒是由苍白（梅毒）螺旋体引起的慢性、系统性性传播疾病。主要通过性途径传播，临床上可表现为一期梅毒、二期梅毒、三期梅毒、潜伏梅毒和先天梅毒（胎传梅毒）等。是《中华人民共和国传染病防治法》中，列为乙类防治管理的病种。可以侵犯皮肤、粘膜及其他多种组织器官，可有多种多样的临床表现，病程中有时呈无症状的潜伏状态。病原体可以通过胎盘传染给胎儿而发生胎儿传染，患有梅毒的孕妇可通过胎盘传染给胎儿，引起胎儿宫内感染，可导致流产、早产、死胎或分娩胎传梅毒给胎儿。目前，酶联免疫（ELISA）法作为新型的梅毒检查手段，以其价格低廉、操作简便、适合大样本量的同时检测越来越受到临床检验的重视
本实验室采用中山生物工程有限公司，梅毒螺旋抗体诊断试剂量盒。原理：
本试剂盒采用双抗原夹心法检测人血清或血浆中的梅毒螺旋体抗体。首先将纯化的TP抗原包被到聚苯乙烯微孔，并保持其活性。在测定时，TP抗原将与标本中的TP抗体特异性结合，形成抗原-抗体复合物，用洗涤的方法使形成的复合物与其他物质分开。然后加入辣根过氧化物酶标记TP抗原，酶标记的TP抗原与TP抗体特异性结合，最终形成抗原-抗体-酶标记复合物，用洗涤的方法使形成的复合物与其它物质分开，最后结合在固相载体上的辣根过氧化物酶的量与标本中的受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中的受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，最后根据颜色反应的深浅够判断受检样本中是否有TP抗体。
检验方法：
1试剂准备：将浓缩洗涤液1瓶加入750ML蒸馏水中混匀备用；
2取出包被板，设空白对照2孔加100ML洗涤液，另设阴性对照和阳性对照各2孔，分别加入50UL阴、阳性对照血清，其余孔加入50UL待检样品，覆封板胶后，置37C温育60分钟：
3洗板：用洗涤液洗板5次，每次静置1分钟，扣干；
4每孔加酶结合物50 UL（空白对照不加），充分混匀，覆封板胶后，置37C温育30分钟。
5去孔内液体，用洗涤液洗板5次，每次静止1分钟后甩干；
6每孔加入底物A、B液各50UL，37C避光显色30分钟后加终止液50UL/孔。
7测定：于450NM波长测吸光度（A）值。
注意事项
1本试剂盒仅用于体外诊断，操作应严格按照说明书进行，防止交叉污染
2用前试剂盒应在室温中平衡后再封启用，不同批号试剂请勿混用
3 未用完的的包被板应及时密封存。ELISA检测梅毒螺旋体抗体是1种敏感性高、特异性强、重复性好的实验诊斷方法，但在实际操作中的影响因素较多，现就比较常见的影响因素作一些探讨：
标本溶血
ELISA法可将反应孔对溶血血清中的血红蛋白的非特异性吸附。Hb具有类过氧化酶活性，其作用与辣根过氧化物酶类似，如果反应孔非特异吸附Hb而残留，则可催化底物显色，使本底吸光度值升高甚至造成假阳性。
标本污染
标本的污染菌体有些含有辣根过氧化物酶，可会使实验出现非特异性显色干扰。致假阳性结果产生。
标本在冰箱中保存过久
血清中IgG可聚合成多聚体，在用本间接法测定中会导致本底过深，甚至造成假阳性。
标本冰冻保存反复冻融
标本中的蛋白等分子可被冰冻保存反复冻融产生械剪切力破坏作用，可致假阳性结果。
当血清标本凝固不全时其中含有部分纤维蛋白原析中，在洗板时，纤维蛋白原析吸附在板孔处，堵塞洗板机针头，酶清洗残留，使其显色，致假阳性。
洗板过程中，如强阳性标本，外溢到附近阴性标本，致其假阳性，如果洗板次数过少，或洗涤时间过短，均可造成假阳性。
结论梅毒ELISA试验对梅毒的诊断有很大的价值，但它存在着一定的假阳性和假阴性情况，其结果一定要结合病史和临床、体格检查综合分析考虑。在实际操作的过程中，严格认真操作避免或减少影响因素， 加强质量管理，才能保证血液检测质量，为临床提供辅住诊断。