【摘 要】
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目的:建立从小鼠腹水中纯化鼠抗人CD28单克隆抗体(mAb)2F5的两步串联层析法.方法:将含mAb 2F5的腹水经离心、过滤及缓冲溶液变换预处理后,先经固相化金属螯合亲和层析法(immo
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目的:建立从小鼠腹水中纯化鼠抗人CD28单克隆抗体(mAb)2F5的两步串联层析法.方法:将含mAb 2F5的腹水经离心、过滤及缓冲溶液变换预处理后,先经固相化金属螯合亲和层析法(immobilized metal affinity chromatography,IMAC)纯化,去除大部分杂蛋白,再经凝胶过滤层析法(gel filtration,GF)精细纯化,并探讨了上样的流速和洗脱液的种类对mAb 2F5纯度的影响.纯化的mAb 2F5的生物学活性用3H-TdR掺入法进行分析.结果:以两步串联层析法纯化的鼠抗人CD28 mAb 2F5的纯度大于90%,总回收率达70%.纯化的mAb 2F5在体外对PBTC具有明显的促增殖作用; 而且其促增殖作用的活性优于Protein G亲和层析法(affinity chromatography,AC)纯化所获得mAb.结论:建立的两步串联层析纯化方法操作简便,所得mAb的纯度高、生物学活性好.
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