【摘 要】
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目的 观察Circ_ZFYVE1(cZFYVE1)对小鼠胰岛β细胞瘤(MIN6)增殖、迁移和凋亡的影响.方法 MIN6细胞分为正常对照组(NC)和高糖组(HG).NC、HG组分别在含有5.5、25 mmol/L葡萄糖的DMEM完全培养基中培养48 h.qRT?PCR检验cZFYVE1表达.Sanger测序对cZFYVE1反向剪接位点的PCR产物进行验证.慢病毒转染实验分为空载体组(Con)组、敲低环状质粒载体组(cZFYVE1?si)和过表达环状质粒载体组(cZFYVE1?OE).Con组使用空载体进行转
【机 构】
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832000 石河子大学医学院;石河子大学第一附属医院内分泌代谢科
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目的 观察Circ_ZFYVE1(cZFYVE1)对小鼠胰岛β细胞瘤(MIN6)增殖、迁移和凋亡的影响.方法 MIN6细胞分为正常对照组(NC)和高糖组(HG).NC、HG组分别在含有5.5、25 mmol/L葡萄糖的DMEM完全培养基中培养48 h.qRT?PCR检验cZFYVE1表达.Sanger测序对cZFYVE1反向剪接位点的PCR产物进行验证.慢病毒转染实验分为空载体组(Con)组、敲低环状质粒载体组(cZFYVE1?si)和过表达环状质粒载体组(cZFYVE1?OE).Con组使用空载体进行转染,cZFYVE1过表达和敲低环状质粒载体转染MIN6胰岛β细胞株.qRT?PCR检测转染后各组MIN6细胞系中cZFYVE1表达水平;CCK8法、EDU法检测细胞增殖;划痕实验检测各组24 h划痕愈合率;流式细胞术检测细胞凋亡率,Westernblot法检测Caspase?3蛋白表达水平.结果 HG组cZFYVE1表达低于NC组[(0.7169±0.1525)vs(1.0000±0.0000),P<0.05].Sanger测序证实cZFYVE1反向剪接位点.与Con组比较,cZFYVE1?si组cZFYVE1表达、EDU阳性率、24 h及48 h细胞增殖活力、24 h划痕愈合率降低(P<0.05),cZFYVE1?OE组cZFYVE1表达、EDU阳性率、24 h及48 h增殖活力、24 h划痕愈合率升高(P<0.05).与Con组比较,cZFYVE1?si组MIN6细胞凋亡率、Caspase?3蛋白表达升高(P<0.05),cZFYVE1?OE组MIN6细胞凋亡率、Caspase?3蛋白表达降低(P<0.05).结论 cZFYVE1可促进MIN6胰岛β细胞增殖、迁移并减少凋亡.
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