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摘要 目的：通过观察内异消瘀汤对大鼠子宫内膜异位症(EMT)模型的血管内环境影响，探讨中药复方治疗EMT的作用机理。方法：采用大鼠自体子宫内膜手术移植法建立子宫内膜异位症动物模型。以内美通作对照，给大鼠灌胃内异消瘀汤汤剂3周后，放射免疫法测定大鼠血清TXB2、6-keto-PGF2α水平。结果：内异消瘀汤模型组和空白组大鼠血清TXB2水平和T/K值均低于内美通组。结论：本造模方法在一定程度上损伤血管内皮细胞，破坏了血管内的稳定性，但并未引起大鼠全身血液循环障碍。内异消瘀汤能纠正血瘀状态，保护血管内皮细胞，改善盆腔微循环，是中药治疗EMT的有效方法之一。
关键词 子宫内膜异位症 内异消瘀汤
资料与方法
材料：雌性未孕SD大鼠共50只，购自西安交通大学医学院实验动物中心，体重200±10g。内异消瘀汤由生大黄、桃仁、当归、川芎、丹参、香附、川牛膝、昆布、莪术、桂枝、昆布、夏枯草等组成，生药购于延安大学附属医院中药房，煎汤浓缩而成。内美通胶囊由Patheon U.K. Limited（英国罗素生产）2.5mg×10粒，生产批号057824。TXB2和6-keto-PGF2α放射免疫分析测定盒购自北京北方生物技术研究所，生产批号20060305。
模型制备：大鼠EMT模型根据Cummings AM方法略加改良。采用3%戊巴比妥钠，以50mg/kg的浓度进行腹腔注射麻醉，固定、备皮、消毒，取尿道口上1cm下腹部正中纵行切口，长约1.5cm，逐层打开腹壁。挑出左侧子宫，游离切取1.5～2cm长的一段子宫组织。将切下的子宫组织放在盛有无菌生理盐水的培养皿中，纵行剖开子宫段，剪取4mm×4mm的子宫内膜组织2块，用0/5肠线以内膜面贴于种植部位四角缝合于右侧卵巢周围的脂肪组织。向腹腔滴入青霉素钠16万U/kg，术毕缝合腹壁及皮肤，再次消毒切口。常规饲养，于术后第1天肌内注射PG-青霉素钠16万U/kg，每天1次，连续5天。所有大鼠(模型组及非模型组)均于术后同时第4天始灌服己烯雌酚0.02mg/kg，连续5天。
药物制备：内异消瘀汤含生药量1520g/L，按60kg成人日服75ml的量，根据公式及换算系数，按体表面积计算［1］，得到大鼠等效剂量118.8mg/kg。根据预试验结果，选用8倍于成人剂量（即95.04mg/100g）作为内异消瘀汤的喂药浓度。采用内异消瘀汤合剂蒸煮浓缩备用。按内美通2.5mg，每周2次量，根据公式及换算系数，得大鼠等效剂量0.4×104mg/kg；配制8倍于成人剂量的浓度喂药。研磨内美通溶解于3%CNC-Na液中，喂药前需摇匀。
动物分组和给药方法：造模前随机抽样选出空白非模型组，造模后将模型大鼠随机分为5组，于造模后常规饲养4周后给予相应药物开始喂药，连续3周，喂药组均按大鼠体重10ml/kg药物予灌胃。具体如下：A组(内异消瘀汤模型组) 10只(每天1次)。B组(内美通模型组)10只(每周2次)。C组(空白模型组)8只，常规喂养，不予加服任何药物，作为阳性对照。D组(3%CNC-Na组)8只(每天1次)。E组(空白非模型组)8只，常规喂养，不予加服任何药物，作为阴性对照。
指标检测：3周后取大鼠，自眼眶后静脉丛取血3ml置入无抗凝管，分离血清；3ml置入抗凝管，分离血浆，-20℃保存，放射免疫法测定TXB2、6-keto-PGF2α水平。操作步骤严格按说明书。
统计学分析：用SPSS11.0软件包分析相关数据，采用多元方差分析、单因素方差分析、两两比较用q检验。结果均以（X[TX-]±S）表示，显著性水准为α=0.05。
结果
结果：①血清TXB2水平:空白非模型组明显低于内美通模型组及无用药模型组(C、D)，差异有显著性，P＜0.01，而与内异消瘀汤模型组比较差异无显著性。内异消瘀汤模型组明显低于内美通模型组及无用药模型组，差异有显著性，P＜0.01。②血清6-keto-PGF2α各组比较无显著性差异。③T/K比值:空白非模型组明显低于内美通模型组、CNC-Na组，差异有显著性，P＜0.01；内异消瘀汤模型组明显低于无用药模型组(C、D)和内美通模型组，差异有显著性，P＜0.05。
讨论
中医学认为EMT的病机为血瘀，治疗上大多以活血化瘀为法［2］。
血清TXB2、6-keto-PGF2α水平及T/K在模型大鼠的变化：TXA2和PGI2半衰期极短，不容易被检测到；TXB2、6-keto-PGF2α分别为TXA2和PGI2的代谢产物，经常用作检测指标。正常状态下，TXA2和PGI2活性保持相对平衡，对维持体内正常血管壁功能和血管内环境的稳定起重要作用。如TXA2分泌增多，或PGI2减少，TXA2-PGI2（即TXB2/6-keto-PGF2α）間动态平衡失调，则可导致血小板聚集，甚至血栓形成，动脉痉挛，动脉粥样硬化以及循环障碍等病理变化。
本试验研究表明，空白模型组与非模型组相比TXB2值明显升高，有统计学意义，说明造模引起组织损伤，无菌性炎症反应引起白细胞聚集、黏附，血液灌流量减少，同时释放细胞毒素和氧自由基，损伤血管内皮细胞，组织液渗出，血液凝固性增加，甚至形成微血栓，从而激活血小板，导致花生四烯酸代谢亢进，释放大量TXA2；但可能血管内皮细胞损伤程度不致于产生严重代谢障碍，对PGI2合成酶功能影响不大，血管壁PGI2分泌减少不明显，故模型组与非模型组相比6-keto-PGF2α无明显减少、T/K也未出现平衡失调的情况。
由此说明此造模方法并未引起大鼠全身血液循环障碍，从模型组TXB2值明显升高看来，此造模方法在一定程度上损伤血管内皮细胞，破坏了血管内的稳定性。这一点启示我们，可在本实验造模方法的基础上，寻找一种可导致全身血液循环障碍的造模方法，以建立理想的病症结合内异症血瘀证模型。
药物对血清TXB2、6-keto-PGF2α水平及T/K的影响：喂服活血化瘀中药复方内异消瘀汤治疗后，TXB2明显下降，T/K下调，与西药组及无用药模型组相比差异有显著性，说明中药可以减少血小板聚集、黏附，降低血液黏滞性，防止血栓形成；保护血管内皮，稳定血管内环境，减少毛细血管通透性；改善机体的血瘀状态。中医认为内异消瘀汤能使血行通畅，冲任气血通调，血瘀导致的痛经、月经不调诸症得以改善；胞宫瘀血既去，方得精血灌溉，亦能摄精成孕［3］；瘀去癥消，盆腔包块自然随之缩小以至消散。
试验结果还提示，内美通作用于模型大鼠后，与中药组和非模型组比较，TXB2及T/K比值皆明显升高，有统计学意义。说明内美通加重血管损伤，使血液黏稠度增加，微血栓形成几率增加，加重血瘀状态。这可能是因为当体内雌二醇水平下降时，卵巢对下丘脑的雌二醇负反馈调节作用削弱，引起体内促性腺激素水平升高的同时，促肾上腺皮质激素的分泌也升高，导致体内胆固醇水平升高，胆固醇沉积于血管壁，损伤血管内皮细胞。
由此提示，现临床上应用于内异症治疗的内美通会加重内异症大鼠“血瘀”状态，导致一系列的并发症;而中药能纠正血瘀状态，保护血管内皮细胞，改善盆腔微循环，是中药治疗内异症有效途径之一，也体现了应用中药治疗的优势。故临床应用时可考虑中西医有机地结合起来，提高该病治疗效果，减少不良反应发生。
参考文献
1 施新猷.医学动物实验方法.北京:人民卫生出版社,1980.
2 高巍，王敏，宫建英，等.内异消癥丸合痛经丸治疗子宫内膜异位症的临床观察.中国中西医结合杂志，2003，23（1）：31.
3 王丽分，吴小玲.中西医结合治疗子宫内膜异位症36例.中医药学刊，2005，03（2）：380-382.
关键词 子宫内膜异位症 内异消瘀汤
资料与方法
材料：雌性未孕SD大鼠共50只，购自西安交通大学医学院实验动物中心，体重200±10g。内异消瘀汤由生大黄、桃仁、当归、川芎、丹参、香附、川牛膝、昆布、莪术、桂枝、昆布、夏枯草等组成，生药购于延安大学附属医院中药房，煎汤浓缩而成。内美通胶囊由Patheon U.K. Limited（英国罗素生产）2.5mg×10粒，生产批号057824。TXB2和6-keto-PGF2α放射免疫分析测定盒购自北京北方生物技术研究所，生产批号20060305。
模型制备：大鼠EMT模型根据Cummings AM方法略加改良。采用3%戊巴比妥钠，以50mg/kg的浓度进行腹腔注射麻醉，固定、备皮、消毒，取尿道口上1cm下腹部正中纵行切口，长约1.5cm，逐层打开腹壁。挑出左侧子宫，游离切取1.5～2cm长的一段子宫组织。将切下的子宫组织放在盛有无菌生理盐水的培养皿中，纵行剖开子宫段，剪取4mm×4mm的子宫内膜组织2块，用0/5肠线以内膜面贴于种植部位四角缝合于右侧卵巢周围的脂肪组织。向腹腔滴入青霉素钠16万U/kg，术毕缝合腹壁及皮肤，再次消毒切口。常规饲养，于术后第1天肌内注射PG-青霉素钠16万U/kg，每天1次，连续5天。所有大鼠(模型组及非模型组)均于术后同时第4天始灌服己烯雌酚0.02mg/kg，连续5天。
药物制备：内异消瘀汤含生药量1520g/L，按60kg成人日服75ml的量，根据公式及换算系数，按体表面积计算［1］，得到大鼠等效剂量118.8mg/kg。根据预试验结果，选用8倍于成人剂量（即95.04mg/100g）作为内异消瘀汤的喂药浓度。采用内异消瘀汤合剂蒸煮浓缩备用。按内美通2.5mg，每周2次量，根据公式及换算系数，得大鼠等效剂量0.4×104mg/kg；配制8倍于成人剂量的浓度喂药。研磨内美通溶解于3%CNC-Na液中，喂药前需摇匀。
动物分组和给药方法：造模前随机抽样选出空白非模型组，造模后将模型大鼠随机分为5组，于造模后常规饲养4周后给予相应药物开始喂药，连续3周，喂药组均按大鼠体重10ml/kg药物予灌胃。具体如下：A组(内异消瘀汤模型组) 10只(每天1次)。B组(内美通模型组)10只(每周2次)。C组(空白模型组)8只，常规喂养，不予加服任何药物，作为阳性对照。D组(3%CNC-Na组)8只(每天1次)。E组(空白非模型组)8只，常规喂养，不予加服任何药物，作为阴性对照。
指标检测：3周后取大鼠，自眼眶后静脉丛取血3ml置入无抗凝管，分离血清；3ml置入抗凝管，分离血浆，-20℃保存，放射免疫法测定TXB2、6-keto-PGF2α水平。操作步骤严格按说明书。
统计学分析：用SPSS11.0软件包分析相关数据，采用多元方差分析、单因素方差分析、两两比较用q检验。结果均以（X[TX-]±S）表示，显著性水准为α=0.05。
结果
结果：①血清TXB2水平:空白非模型组明显低于内美通模型组及无用药模型组(C、D)，差异有显著性，P＜0.01，而与内异消瘀汤模型组比较差异无显著性。内异消瘀汤模型组明显低于内美通模型组及无用药模型组，差异有显著性，P＜0.01。②血清6-keto-PGF2α各组比较无显著性差异。③T/K比值:空白非模型组明显低于内美通模型组、CNC-Na组，差异有显著性，P＜0.01；内异消瘀汤模型组明显低于无用药模型组(C、D)和内美通模型组，差异有显著性，P＜0.05。
讨论
中医学认为EMT的病机为血瘀，治疗上大多以活血化瘀为法［2］。
血清TXB2、6-keto-PGF2α水平及T/K在模型大鼠的变化：TXA2和PGI2半衰期极短，不容易被检测到；TXB2、6-keto-PGF2α分别为TXA2和PGI2的代谢产物，经常用作检测指标。正常状态下，TXA2和PGI2活性保持相对平衡，对维持体内正常血管壁功能和血管内环境的稳定起重要作用。如TXA2分泌增多，或PGI2减少，TXA2-PGI2（即TXB2/6-keto-PGF2α）間动态平衡失调，则可导致血小板聚集，甚至血栓形成，动脉痉挛，动脉粥样硬化以及循环障碍等病理变化。
本试验研究表明，空白模型组与非模型组相比TXB2值明显升高，有统计学意义，说明造模引起组织损伤，无菌性炎症反应引起白细胞聚集、黏附，血液灌流量减少，同时释放细胞毒素和氧自由基，损伤血管内皮细胞，组织液渗出，血液凝固性增加，甚至形成微血栓，从而激活血小板，导致花生四烯酸代谢亢进，释放大量TXA2；但可能血管内皮细胞损伤程度不致于产生严重代谢障碍，对PGI2合成酶功能影响不大，血管壁PGI2分泌减少不明显，故模型组与非模型组相比6-keto-PGF2α无明显减少、T/K也未出现平衡失调的情况。
由此说明此造模方法并未引起大鼠全身血液循环障碍，从模型组TXB2值明显升高看来，此造模方法在一定程度上损伤血管内皮细胞，破坏了血管内的稳定性。这一点启示我们，可在本实验造模方法的基础上，寻找一种可导致全身血液循环障碍的造模方法，以建立理想的病症结合内异症血瘀证模型。
药物对血清TXB2、6-keto-PGF2α水平及T/K的影响：喂服活血化瘀中药复方内异消瘀汤治疗后，TXB2明显下降，T/K下调，与西药组及无用药模型组相比差异有显著性，说明中药可以减少血小板聚集、黏附，降低血液黏滞性，防止血栓形成；保护血管内皮，稳定血管内环境，减少毛细血管通透性；改善机体的血瘀状态。中医认为内异消瘀汤能使血行通畅，冲任气血通调，血瘀导致的痛经、月经不调诸症得以改善；胞宫瘀血既去，方得精血灌溉，亦能摄精成孕［3］；瘀去癥消，盆腔包块自然随之缩小以至消散。
试验结果还提示，内美通作用于模型大鼠后，与中药组和非模型组比较，TXB2及T/K比值皆明显升高，有统计学意义。说明内美通加重血管损伤，使血液黏稠度增加，微血栓形成几率增加，加重血瘀状态。这可能是因为当体内雌二醇水平下降时，卵巢对下丘脑的雌二醇负反馈调节作用削弱，引起体内促性腺激素水平升高的同时，促肾上腺皮质激素的分泌也升高，导致体内胆固醇水平升高，胆固醇沉积于血管壁，损伤血管内皮细胞。
由此提示，现临床上应用于内异症治疗的内美通会加重内异症大鼠“血瘀”状态，导致一系列的并发症;而中药能纠正血瘀状态，保护血管内皮细胞，改善盆腔微循环，是中药治疗内异症有效途径之一，也体现了应用中药治疗的优势。故临床应用时可考虑中西医有机地结合起来，提高该病治疗效果，减少不良反应发生。
参考文献
1 施新猷.医学动物实验方法.北京:人民卫生出版社,1980.
2 高巍，王敏，宫建英，等.内异消癥丸合痛经丸治疗子宫内膜异位症的临床观察.中国中西医结合杂志，2003，23（1）：31.
3 王丽分，吴小玲.中西医结合治疗子宫内膜异位症36例.中医药学刊，2005，03（2）：380-382.