【摘 要】
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采用环介导等温扩增(Loop Mediated Isothermal Amplification,LAMP)技术,利用实时浊度仪实时检测LAMP反应过程中所产生的焦磷酸镁白色沉淀,实现对扩增反应全过程的监控,建立
【机 构】
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华南理工大学轻工与食品学院; 珠海出入境检验检疫局技术中心;
【基金项目】
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国家质检总局科技计划项目(2010IK174)
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采用环介导等温扩增(Loop Mediated Isothermal Amplification,LAMP)技术,利用实时浊度仪实时检测LAMP反应过程中所产生的焦磷酸镁白色沉淀,实现对扩增反应全过程的监控,建立食品中肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157的LAMP实时浊度法快速检测方法。针对EHEC O157抗原基因rfbE的序列设计4条特异性LAMP引物。通过实时浊度仪在恒温63℃下1小时完成检测,对方法的特异性、灵敏度、稳定性进行了评价,并进行了食品样品添加试验以评价其应用于实际样品的效果。结果显示,经优化后,该方法的最低检出限为2.8×103 CFU/mL,与PCR法灵敏度比较高100倍。样品添加试验能检出的最低添加菌量为2.8×102 CFU/25 g(或mL)。LAMP实时浊度法具有快速、灵敏、特异性高、操作简便的优势,为食源致病菌快速筛查提供了一种良好的检测模式。
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