【摘 要】
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目的 探讨增强型绿色荧光蛋白( EGFP)为报告基因、人脑源性神经营养因子(hBDNF)为目的基因的重组腺病毒载体Ad5-hBDNF-EGFP体外转染大鼠骨髓间质干细胞(rMSCs)的特点,从基因
【基金项目】
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国家高等学校博士学科专项科研基金资助项目;
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目的 探讨增强型绿色荧光蛋白( EGFP)为报告基因、人脑源性神经营养因子(hBDNF)为目的基因的重组腺病毒载体Ad5-hBDNF-EGFP体外转染大鼠骨髓间质干细胞(rMSCs)的特点,从基因转录及蛋白表达水平检测hBDNF基因在体外rMSCs中的表达。方法 分离、培养rMSCs,流式细胞仪检测CD34、CD45、CD29、CD90的表达,腺病毒体外转染第3代rMSCs,荧光显微镜下观察绿色荧光信号,流式细胞仪检测转染率,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot法检测hBDNF mRNA和hBDNF蛋白的表达。结果 CD34、CD45、CD29、CD90阳性细胞比率分别为0.8％、6.8％、98.9％、99.9％。腺病毒转染rMSCs后可见绿色荧光信号,强度随腺病毒感染复数(MOI)的增加而增强;MOI为10、20、50、100、200时,转染3d后,转染率分别为20.2％、43.2％、67.2％、100.0％、100.0％;hBDNF mRNA及hBDNF蛋白的表达水平亦随腺病毒MOI的增加而增加,当MOI=100时,表达到高峰,3～l0d为表达高峰期。结论 重组腺病毒体外有效转染rMSCs,成功获取基因工程干细胞hBDNF-rMSCs,该细胞可大量表达hBDNF mRNA及hBDNF蛋白,表达水平与MOI及转染时间明显相关。
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