【摘 要】
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目的 探讨针对结构基因g6341的PCR-RFLP方法 在新生隐球菌基因分型中的应用价值,并与PCR指纹分型法进行比较.方法 以野生型噬菌体M13中针对小卫星DNA的核心序列为单引物,对受试的新生隐球菌进行PCR指纹分型.选择结构基因g6341进行PCR-RFLP分析,在序列保守区设计通用引物,筛选合适的限制性内切酶进行RFLP分析,并与PCR指纹法进行比较.g6341基因扩增片段测序,进行系统发
【机 构】
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200092,上海交通大学医学院附属新华医院皮肤科,200092,上海交通大学医学院附属新华医院皮肤科,复旦大学遗传所遗传工程国家重点实验室,复旦大学遗传所遗传工程国家重点实验室
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目的 探讨针对结构基因g6341的PCR-RFLP方法 在新生隐球菌基因分型中的应用价值,并与PCR指纹分型法进行比较.方法 以野生型噬菌体M13中针对小卫星DNA的核心序列为单引物,对受试的新生隐球菌进行PCR指纹分型.选择结构基因g6341进行PCR-RFLP分析,在序列保守区设计通用引物,筛选合适的限制性内切酶进行RFLP分析,并与PCR指纹法进行比较.g6341基因扩增片段测序,进行系统发育分析,研究各主要基因型间的亲缘关系.结果 多位点基因序列分析表明,结构基因g6341可作为RFLP分析的合适靶点.对76株新生隐球菌的基因分型结果 显示,针对g6341的PCR-RFLP方法 与PCR指纹法结果 一致.分析g6341基因部分序列得出,8种主要基因型菌株相互间的同源性在84%～97%之间.同一主要基因型菌株的同源性在99%～100%之间.分子发育树中,VNⅠ-VNⅣ基因型、VGⅠ-VGⅣ基因型分别聚在一类.结论 针对结构基因g6341的PCR-RFLP方法 可作为新生隐球菌分子分型的有效工具,对g6341基因的序列分析可揭示不同菌株间的遗传进化关系。
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