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【摘 要】 目的：建立高效液相色谱法准确测定细辛中马兜铃酸A的含量，保证临床用药安全。方法：高效液相色谱法，色谱柱为Phenomenex Luna C18（250mm×4.6mm，5μm），流动相：乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液（含磷酸1mol/L）（37：63），检测波长为387nm，进样体积为20μl，柱温为35℃。结果：马兜铃酸A浓度呈良好的线性关系，回归方程为：Y=1306X-557.3，R= 0.999，平均加样回收率为99.34%，重复性RSD为2.3% 。结论：本方法简单、快速、重现性好，可在马兜铃酸A含量安全范围内对其作出限度检查。
【关键词】 细辛 马兜铃酸A HPLC 限度检查
【Abstract】 Objective： To determine of Aristolonchic acid A in Herba Asari by HPLC， in order to guarantee the safety of clinical application. Methods： HPLC method was used to determine Aristolochic acid A in Herba Asari. Column：Phenomenex Luna C18（250mm×4.6mm，5？m），Acetonitrile-0.05mol/L NaH2PO4（contain Phosphate 1mol/L） as the mobile phase， the detection wavelength was 387nm， injection volume was 20？l，column temperature was 35℃. Results：A good linearity was obtained Y=1306X-557.3，R=0.999， the average recovery of Aristolochic acid A was 99.34% ， RSD=2.3% ， Conclusion： It revealed that the method described was accurate，rapid and reproducible ，and this method could finish the limits detection of Aristolochic acid A in Herba Asari in its scope that is save to body.
【摘 要】 Herba Asari；Aristolonchic acid A；HPLC；Limit detection
【中图分类号】 R284 【文献标识码】 A 【文章编号】 1671-5160（2014）03-0211-01
1 材料与方法
1.1 對照品溶液的制备
精密称取马兜铃酸A对照品15mg，加甲醇制成每1ml含马兜铃酸A 1.5μg的溶液。
1.2 供试品溶液制备方法
取细辛粉末1.5g，精密加甲醇10ml回流提取1小时，摇匀滤过，再过0.45μm 的滤膜，取续滤液。
1.3 标准曲线制备
分别精密吸取上述对照品溶液5μl，10μl，15μl，20μl，25μl在387nm的波长处测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量（μl）为横坐标进行回归计算，得到马兜铃酸A线性方程为Y=1306X-557.3，R=0.999。
1.4 精密度试验 a
精密吸取对照品溶液20ul进样测定峰面积，n=6，计算出RSD值为1.6% 。
1.5 重复性试验
准备供试品6份测定被测成分含量，得出马兜铃酸A含量平均值为3.71μg/g ， RSD=2.4%，n=6。a
1.6 稳定性试验
精密吸取对照品溶液20ul分别于0h，4h，8h，16h，24h进样，RSD=1.4% 。
1.7 加样回收试验
取已知含量的细辛药材粉末1g，精密称定平行6份，分别精密加入马兜铃酸A对照品溶液1.5μg，加甲醇10ml称定重量，回流提取1小时放冷摇匀滤过，滤液过0.45μm滤膜。样品平均回收率为99.34% ，RSD=1.5%，n=6。
1.8 最低检测限试验
取适量浓度适量体积对照品注入高效液相色谱分析，逐步稀释，最后经测量取0.00015mg/ml对照品溶液5μl进样得到信噪比为2：1，以此计算检测限为0.75ng 。
1.9 专属性试验
精密加甲醇10ml，回流提取1h，摇匀滤过再过0.45 μm 的微孔滤膜。6份样品在对照品出峰处未检出峰。
2 结果
2.1 标准曲线
要求：相关系数r≥0.999，本实验得出r=0.999，表明马兜铃酸A含量在7.5ng—37.5ng范围内呈线性关系：Y=1306X-557.3 。
2.2 精密度实验结果
要求：RSD≤2.0% ，称样量为15.00mg ，本实验得出RSD=1.6%，表明本方法马兜铃酸A精密度很好。
2.3 重复性试验结果
要求：RSD≤2.0% ，本实验得出RSD=2.4%，试验中RSD值稍大于要求范围，但样品中马兜铃酸A含量甚微，因此仍可说明本方法重复性良好。
2.4 稳定性试验结果
要求：RSD≤2.0% ，本实验得出RSD=1.4% ，表明本方法测定马兜铃酸A在24h内稳定性良好。
2.5 加样回收试验结果
要求：回收率在95%-105%之间，RSD≤2.0% ，试验结果回收率为99.34% ，RSD=1.5% ，符合要求。
2.6 最低检测限试验结果
本方法得出最低检测限为0.75ng ，信噪比为2：1。
2.7 专属性试验结果
结果表明溶剂对试验结果没有影响。
3 结论
本方法简单、快速、实用性好，可在马兜铃酸A含量安全范围内对其作出限度检查，可用于细辛药材中马兜铃酸A的限度检测，以保证临床用药安全。
【关键词】 细辛 马兜铃酸A HPLC 限度检查
【Abstract】 Objective： To determine of Aristolonchic acid A in Herba Asari by HPLC， in order to guarantee the safety of clinical application. Methods： HPLC method was used to determine Aristolochic acid A in Herba Asari. Column：Phenomenex Luna C18（250mm×4.6mm，5？m），Acetonitrile-0.05mol/L NaH2PO4（contain Phosphate 1mol/L） as the mobile phase， the detection wavelength was 387nm， injection volume was 20？l，column temperature was 35℃. Results：A good linearity was obtained Y=1306X-557.3，R=0.999， the average recovery of Aristolochic acid A was 99.34% ， RSD=2.3% ， Conclusion： It revealed that the method described was accurate，rapid and reproducible ，and this method could finish the limits detection of Aristolochic acid A in Herba Asari in its scope that is save to body.
【摘 要】 Herba Asari；Aristolonchic acid A；HPLC；Limit detection
【中图分类号】 R284 【文献标识码】 A 【文章编号】 1671-5160（2014）03-0211-01
1 材料与方法
1.1 對照品溶液的制备
精密称取马兜铃酸A对照品15mg，加甲醇制成每1ml含马兜铃酸A 1.5μg的溶液。
1.2 供试品溶液制备方法
取细辛粉末1.5g，精密加甲醇10ml回流提取1小时，摇匀滤过，再过0.45μm 的滤膜，取续滤液。
1.3 标准曲线制备
分别精密吸取上述对照品溶液5μl，10μl，15μl，20μl，25μl在387nm的波长处测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量（μl）为横坐标进行回归计算，得到马兜铃酸A线性方程为Y=1306X-557.3，R=0.999。
1.4 精密度试验 a
精密吸取对照品溶液20ul进样测定峰面积，n=6，计算出RSD值为1.6% 。
1.5 重复性试验
准备供试品6份测定被测成分含量，得出马兜铃酸A含量平均值为3.71μg/g ， RSD=2.4%，n=6。a
1.6 稳定性试验
精密吸取对照品溶液20ul分别于0h，4h，8h，16h，24h进样，RSD=1.4% 。
1.7 加样回收试验
取已知含量的细辛药材粉末1g，精密称定平行6份，分别精密加入马兜铃酸A对照品溶液1.5μg，加甲醇10ml称定重量，回流提取1小时放冷摇匀滤过，滤液过0.45μm滤膜。样品平均回收率为99.34% ，RSD=1.5%，n=6。
1.8 最低检测限试验
取适量浓度适量体积对照品注入高效液相色谱分析，逐步稀释，最后经测量取0.00015mg/ml对照品溶液5μl进样得到信噪比为2：1，以此计算检测限为0.75ng 。
1.9 专属性试验
精密加甲醇10ml，回流提取1h，摇匀滤过再过0.45 μm 的微孔滤膜。6份样品在对照品出峰处未检出峰。
2 结果
2.1 标准曲线
要求：相关系数r≥0.999，本实验得出r=0.999，表明马兜铃酸A含量在7.5ng—37.5ng范围内呈线性关系：Y=1306X-557.3 。
2.2 精密度实验结果
要求：RSD≤2.0% ，称样量为15.00mg ，本实验得出RSD=1.6%，表明本方法马兜铃酸A精密度很好。
2.3 重复性试验结果
要求：RSD≤2.0% ，本实验得出RSD=2.4%，试验中RSD值稍大于要求范围，但样品中马兜铃酸A含量甚微，因此仍可说明本方法重复性良好。
2.4 稳定性试验结果
要求：RSD≤2.0% ，本实验得出RSD=1.4% ，表明本方法测定马兜铃酸A在24h内稳定性良好。
2.5 加样回收试验结果
要求：回收率在95%-105%之间，RSD≤2.0% ，试验结果回收率为99.34% ，RSD=1.5% ，符合要求。
2.6 最低检测限试验结果
本方法得出最低检测限为0.75ng ，信噪比为2：1。
2.7 专属性试验结果
结果表明溶剂对试验结果没有影响。
3 结论
本方法简单、快速、实用性好，可在马兜铃酸A含量安全范围内对其作出限度检查，可用于细辛药材中马兜铃酸A的限度检测，以保证临床用药安全。