【摘 要】
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目的构建和鉴定人巨细胞病毒（HCMV）UL123基因外显子4（ie1-exon4）的诱饵质粒,并评价其用于细菌双杂交系统筛选文库的可行性。方法以重组质粒pTWIN1/ie1为模板扩增ie1-exon4,克隆入
【机 构】
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南华大学附属第一医院临床教学办,中南大学湘雅医学院医学微生物学系
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目（No：30470088）
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目的构建和鉴定人巨细胞病毒（HCMV）UL123基因外显子4（ie1-exon4）的诱饵质粒,并评价其用于细菌双杂交系统筛选文库的可行性。方法以重组质粒pTWIN1/ie1为模板扩增ie1-exon4,克隆入pBT质粒,转化E.coliXL1-BlueMRF’Kan,经PCR、限制性酶切和测序鉴定阳性重组子,提取阳性重组质粒,再转化入细菌双杂交系统报告菌株,诱导表达重组融合蛋白,用SDS-PAGE和WesternBlot对表达产物进行鉴定,并进一步鉴定重组子自身激活作用。结果细菌双杂交诱饵质粒pBT/ie
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