人正常垂体组织全长cDNA文库的构建及初步鉴定

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目的应用SMART技术构建人正常垂体组织的全长cDNA文库。方法用TRIzol试剂提取组织总RNA,利用逆转录酶的末端转移酶活性,预先加入SMART引物,在CDS Ⅲ/3’PCR引物的引导下合成cDNA第一链,LD-PCR扩增得到全长双链cDNA,经SfiⅠ酶切及cDNA分级分离后,克隆入改造的pBluescriptⅡSK载体,得到原始文库。将质粒转化入宿主茵DH-5α,以初步鉴定文库的质量。结果文库的总库容为1×10^5克隆.重组率93.45%,插入片段平均长度〉1000bp,cDNA的完整性
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