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为避开有性融合的局限性,挖掘同种接合型酵母菌株无性融合的潜在应用价值,利用质粒构建了酵母双杂交工程菌株Y2HGold的亮氨酸缺陷型和色氨酸缺陷型菌株;接着采用酶解法进行四因素三水平正交实验获得原生质体制备方案：酶解温度30℃、处理时间80min、预处理剂含0.1%（w/v）巯基乙醇和0.1%（w/v）EDTA-2Na,酶解液为1.5%（w/v）蜗牛酶和1.5%（w/v）纤维素酶混合,使得原生质体的制备及再生率分别达82%和37%;最后采用PEG诱导融合的方法,经过同样正交实验得到Y2HGold无性融合条件