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摘要:制定复方川乌止痛贴剂中酯型生物碱及总生物碱的含量测定方法。分别采用改良异羟肟酸铁-高氯酸铁法及酸性染料比色法测定制剂中的酯型生物碱及乌头类总生物碱的含量。酯型生物碱在6.4-64mg/ml间有良好的线性关系;平均加样回收率为99.7%,RSD为2.25%(n=5)。乌头总生物碱在1.94-15.52mg/ml间有良好的线性关系;平均加样回收率为99.47%,RSD为2.07%(n=5)。结论结果准确,重复性好,可用于该制剂中酯型生物碱及总生物碱的质量控制。
关键词:川乌;止痛贴;药理;分析
中图分类号:R194文献标识码:A文章编号:1007-9599 (2010) 01-0000-01
川乌是毛茛科植物乌头的干燥母根,其炮制品制川乌是复方川乌止痛贴剂中的主要组成药物,功能祛风除湿,温经止痛。制川乌用于制剂中,既要检查酯型生物碱的含量,以保证临床用药的安全性,同时又要测定乌头类总生物碱的含量,以保证其有效性。本实验对复方川乌止痛贴剂中的酯型生物碱及总生物碱均进行了研究。
一、仪器与试剂
日本岛津UV-2401紫外分光光度计。制川乌(产地:四川)购自江西中药饮片厂,经南京中医药大学生药学教授陈建伟进行品种鉴定。
乌头碱对照品(购自中国药品生物检定所,供含量测定用,批号:110720-200409)。
3批中试产品由某制药厂提供。所有试剂均为分析纯。
二、方法与结果
(一)酯型生物碱的含量测定
1.检测波长的选择精密称取乌头碱对照品10mg,用无水乙醇定容于10ml量瓶中,精密量取标准溶液1ml,置于25ml量瓶中,加无水乙醇使成2.5ml,精密加入碱性盐酸羟胺试液1.5ml,摇匀,在60-65℃水浴中保温10min,放冷,加高氯酸铁试液13ml,摇匀,放置5min,精密加入高氯酸试液8ml,用高氯酸铁试液稀释至刻度,摇匀,放置15min后,经紫外分光光度计在200-800nm对其进行扫描,确定最大吸收波长为510nm。
2.对照品溶液的制备精密吸取乌头碱对照品10mg,置10ml量瓶中,用无水乙醇溶解并稀释至刻度。
3.供试品溶液的制备本品去除被衬后,粉碎,精密称定10g,精密转移入具塞锥形瓶,加入pH3-4的无水乙醇150ml,浸渍1h后,超声30min,离心。取上清液,回收乙醇后,用10ml 0.6mol/L的HCl分次转移入分液漏斗中,乙醚萃取3次(20,10,10ml),取酸水层,加氨试液调pH值至9,氯仿提取3次(10,10,10ml),合并氯仿层,蒸干。残渣加无水乙醇适量使溶解,转入5ml量瓶中,用无水乙醇分次洗涤容器,洗涤液并入量瓶中,再加无水乙醇至刻度,摇匀。精密量取上述溶液及无水乙醇各2.5ml,置25ml量瓶中,各精密加入碱性盐酸羟胺试液1.5ml,摇匀,在60～65℃水浴中保温10min,放冷,加高氯酸铁试液13ml,摇匀,放置5min,精密加入高氯酸试液8ml,用高氯酸铁试液稀释至刻度,摇匀,即得。
4.线性关系考察精密量取浓度为1.024mg/ml的对照品溶液0,0.25,0.50,1.0,1.5,2.0,2.5ml,分别置于25ml量瓶中,均加无水乙醇使成2.5ml,各精密加入碱性盐酸羟胺试液1.5ml,摇匀,在60-65℃水浴中保温10min,放冷,加高氯酸铁试液13ml,摇匀,放置5min,精密加入高氯酸试液8ml,用高氯酸铁试液稀释至刻度,摇匀,放置15min,照分光光度法(附录ⅤB)在520nm的波长处测定吸收度,以浓度为纵坐标,吸收度为横坐标,绘制标准曲线C=8.824A-3.746(r=0.9998)。结果表明本品溶液在浓度6.4-64mg/ml范围内吸收度A与浓度C呈良好的线性关系。
5.精密度考察取浓度为1.024mg/ml的对照品供试液,在520nm的波长处,每次间隔约30min,连续6次测定吸收度,计算其RSD=0.28%。
6.重复性考察取去除被衬后的同一批号样品适量,精密称定5份,按供试品溶液的制备方法制得供试液。分别测定吸收度,测得酯型生物碱的平均含量为0.1151mg/g,RSD=2.60%。
7.稳定性考察取去除被衬后的同一批号样品适量,精密称定5份,按供试品溶液的制备方法制得供试液。每间隔1h,测定吸收度,连续考察7次,测得RSD=0.4%(n=7)。
(二)总生物碱的含量测定
1.检测波长的选择精密吸取乌头碱对照品4mg,置50ml量瓶中,用氯仿溶解并稀释至刻度,摇匀,精密吸取1ml,置分液漏斗中,精密加入氯仿至10ml,再精密加入pH3.0醋酸盐缓冲液10ml和0.1%溴甲酚绿溶液2ml,强力振摇5min,静置20min,分取氯仿层,剩余溶液再用氯仿萃取两次(10,5ml),合并氯仿层,于干燥滤纸滤过,滤液用氯仿定容至25ml。经紫外分光光度计在200-800nm对其进行扫描,确定最大吸收波长为413nm。
2.对照品溶液的制备精密吸取乌头碱对照品4mg,置50ml量瓶中,用氯仿溶解并稀释至刻度,摇匀,制得对照品溶液(C=0.0776mg/ml)。
3.供试品溶液的制备本品去除被衬后,精密称定5g,精密转移入具塞锥形瓶,加入pH值3-4的无水乙醇150ml,浸渍1h后,超声30min,离心。再将其精密转入分液漏斗中,按标准曲线制备项下的方法,精密加入pH3.0醋酸盐缓冲液10ml和0.1%溴甲酚绿溶液10ml,强力振摇5min,静置20min,分取氯仿层,剩余溶液再用氯仿萃取两次(10,5ml),合并氯仿层,于干燥滤纸滤过,滤液用氯仿定容至25ml,制得供试品溶液。
4.线性关系考察精密吸取对照品溶液0,1,2,4,6,8ml,分别置分液漏斗中,依次精密加入氯仿至10ml,按供试品溶液的制备项下自“精密加入pH3.0醋酸盐缓冲液10ml”起,至“滤液用氯仿定容至25ml”,摇匀。照紫外分光光度法,分别在413nm的波长处测定吸收度。再以浓度为纵坐标,以吸收度为横坐标,绘制标准曲线C=0.5153A-0.00872(r=0.9997)。结果表明乌头总生物碱在1.94-15.52mg/ml间有良好的线性关系。
5.精密度考察取浓度为0.1552mg/ml的对照品供试液,在413nm的波长处,每次间隔约30min,连续6次测定吸收度,计算其RSD=0.53%。
6.重复性考察取去除被衬后的同一批号样品适量,精密称定5份,按供试品溶液的制备方法制得供试液。分别测定吸收度,测得总生物碱的平均含量为0.1053mg/g,RSD=1.06%。
7.稳定性考察取去除被衬后的同一批号样品适量,精密称定5份,按供试品溶液的制备方法制得供试液。每间隔1h,测定吸收度,连续考察7次,测得RSD=0.33%(n=7)。
三、小结
由以上实验结果可知,本文所用的改良异羟肟酸铁-高氯酸铁法及酸性染料比色法,精密度、重复性和加样回收率等均较好,符合定量要求。
根据以上测定结果,暂定每克复方川乌止痛贴中含酯型生物碱以乌头碱计,平均含量为0.0916mg;复方川乌止痛贴中含总乌头碱以乌头碱计,平均含量为0.1187mg。
关键词:川乌;止痛贴;药理;分析
中图分类号:R194文献标识码:A文章编号:1007-9599 (2010) 01-0000-01
川乌是毛茛科植物乌头的干燥母根,其炮制品制川乌是复方川乌止痛贴剂中的主要组成药物,功能祛风除湿,温经止痛。制川乌用于制剂中,既要检查酯型生物碱的含量,以保证临床用药的安全性,同时又要测定乌头类总生物碱的含量,以保证其有效性。本实验对复方川乌止痛贴剂中的酯型生物碱及总生物碱均进行了研究。
一、仪器与试剂
日本岛津UV-2401紫外分光光度计。制川乌(产地:四川)购自江西中药饮片厂,经南京中医药大学生药学教授陈建伟进行品种鉴定。
乌头碱对照品(购自中国药品生物检定所,供含量测定用,批号:110720-200409)。
3批中试产品由某制药厂提供。所有试剂均为分析纯。
二、方法与结果
(一)酯型生物碱的含量测定
1.检测波长的选择精密称取乌头碱对照品10mg,用无水乙醇定容于10ml量瓶中,精密量取标准溶液1ml,置于25ml量瓶中,加无水乙醇使成2.5ml,精密加入碱性盐酸羟胺试液1.5ml,摇匀,在60-65℃水浴中保温10min,放冷,加高氯酸铁试液13ml,摇匀,放置5min,精密加入高氯酸试液8ml,用高氯酸铁试液稀释至刻度,摇匀,放置15min后,经紫外分光光度计在200-800nm对其进行扫描,确定最大吸收波长为510nm。
2.对照品溶液的制备精密吸取乌头碱对照品10mg,置10ml量瓶中,用无水乙醇溶解并稀释至刻度。
3.供试品溶液的制备本品去除被衬后,粉碎,精密称定10g,精密转移入具塞锥形瓶,加入pH3-4的无水乙醇150ml,浸渍1h后,超声30min,离心。取上清液,回收乙醇后,用10ml 0.6mol/L的HCl分次转移入分液漏斗中,乙醚萃取3次(20,10,10ml),取酸水层,加氨试液调pH值至9,氯仿提取3次(10,10,10ml),合并氯仿层,蒸干。残渣加无水乙醇适量使溶解,转入5ml量瓶中,用无水乙醇分次洗涤容器,洗涤液并入量瓶中,再加无水乙醇至刻度,摇匀。精密量取上述溶液及无水乙醇各2.5ml,置25ml量瓶中,各精密加入碱性盐酸羟胺试液1.5ml,摇匀,在60～65℃水浴中保温10min,放冷,加高氯酸铁试液13ml,摇匀,放置5min,精密加入高氯酸试液8ml,用高氯酸铁试液稀释至刻度,摇匀,即得。
4.线性关系考察精密量取浓度为1.024mg/ml的对照品溶液0,0.25,0.50,1.0,1.5,2.0,2.5ml,分别置于25ml量瓶中,均加无水乙醇使成2.5ml,各精密加入碱性盐酸羟胺试液1.5ml,摇匀,在60-65℃水浴中保温10min,放冷,加高氯酸铁试液13ml,摇匀,放置5min,精密加入高氯酸试液8ml,用高氯酸铁试液稀释至刻度,摇匀,放置15min,照分光光度法(附录ⅤB)在520nm的波长处测定吸收度,以浓度为纵坐标,吸收度为横坐标,绘制标准曲线C=8.824A-3.746(r=0.9998)。结果表明本品溶液在浓度6.4-64mg/ml范围内吸收度A与浓度C呈良好的线性关系。
5.精密度考察取浓度为1.024mg/ml的对照品供试液,在520nm的波长处,每次间隔约30min,连续6次测定吸收度,计算其RSD=0.28%。
6.重复性考察取去除被衬后的同一批号样品适量,精密称定5份,按供试品溶液的制备方法制得供试液。分别测定吸收度,测得酯型生物碱的平均含量为0.1151mg/g,RSD=2.60%。
7.稳定性考察取去除被衬后的同一批号样品适量,精密称定5份,按供试品溶液的制备方法制得供试液。每间隔1h,测定吸收度,连续考察7次,测得RSD=0.4%(n=7)。
(二)总生物碱的含量测定
1.检测波长的选择精密吸取乌头碱对照品4mg,置50ml量瓶中,用氯仿溶解并稀释至刻度,摇匀,精密吸取1ml,置分液漏斗中,精密加入氯仿至10ml,再精密加入pH3.0醋酸盐缓冲液10ml和0.1%溴甲酚绿溶液2ml,强力振摇5min,静置20min,分取氯仿层,剩余溶液再用氯仿萃取两次(10,5ml),合并氯仿层,于干燥滤纸滤过,滤液用氯仿定容至25ml。经紫外分光光度计在200-800nm对其进行扫描,确定最大吸收波长为413nm。
2.对照品溶液的制备精密吸取乌头碱对照品4mg,置50ml量瓶中,用氯仿溶解并稀释至刻度,摇匀,制得对照品溶液(C=0.0776mg/ml)。
3.供试品溶液的制备本品去除被衬后,精密称定5g,精密转移入具塞锥形瓶,加入pH值3-4的无水乙醇150ml,浸渍1h后,超声30min,离心。再将其精密转入分液漏斗中,按标准曲线制备项下的方法,精密加入pH3.0醋酸盐缓冲液10ml和0.1%溴甲酚绿溶液10ml,强力振摇5min,静置20min,分取氯仿层,剩余溶液再用氯仿萃取两次(10,5ml),合并氯仿层,于干燥滤纸滤过,滤液用氯仿定容至25ml,制得供试品溶液。
4.线性关系考察精密吸取对照品溶液0,1,2,4,6,8ml,分别置分液漏斗中,依次精密加入氯仿至10ml,按供试品溶液的制备项下自“精密加入pH3.0醋酸盐缓冲液10ml”起,至“滤液用氯仿定容至25ml”,摇匀。照紫外分光光度法,分别在413nm的波长处测定吸收度。再以浓度为纵坐标,以吸收度为横坐标,绘制标准曲线C=0.5153A-0.00872(r=0.9997)。结果表明乌头总生物碱在1.94-15.52mg/ml间有良好的线性关系。
5.精密度考察取浓度为0.1552mg/ml的对照品供试液,在413nm的波长处,每次间隔约30min,连续6次测定吸收度,计算其RSD=0.53%。
6.重复性考察取去除被衬后的同一批号样品适量,精密称定5份,按供试品溶液的制备方法制得供试液。分别测定吸收度,测得总生物碱的平均含量为0.1053mg/g,RSD=1.06%。
7.稳定性考察取去除被衬后的同一批号样品适量,精密称定5份,按供试品溶液的制备方法制得供试液。每间隔1h,测定吸收度,连续考察7次,测得RSD=0.33%(n=7)。
三、小结
由以上实验结果可知,本文所用的改良异羟肟酸铁-高氯酸铁法及酸性染料比色法,精密度、重复性和加样回收率等均较好,符合定量要求。
根据以上测定结果,暂定每克复方川乌止痛贴中含酯型生物碱以乌头碱计,平均含量为0.0916mg;复方川乌止痛贴中含总乌头碱以乌头碱计,平均含量为0.1187mg。