【摘 要】
：
考察了采用二甲基酚橙测定过氧化氢(Xylenol-orange-assay-of-hydrogen-peroxide,XOAHP)法测定尿酸酶活性的可靠性以及识别高活性尿酸酶突变体的方法.将苛求芽孢杆菌(Bacillu
【机 构】
：
重庆医科大学检验医学院,临床检验诊断学教育部重点实验室;
【基金项目】
：
重庆市科委自然科学基金重点项目(CSTC2011BA5039);国家自然科学基金项目(30672009);教育部新世纪优秀人才支持计划项目(NCET-09-0928)资助~~
论文部分内容阅读
考察了采用二甲基酚橙测定过氧化氢(Xylenol-orange-assay-of-hydrogen-peroxide,XOAHP)法测定尿酸酶活性的可靠性以及识别高活性尿酸酶突变体的方法.将苛求芽孢杆菌(Bacillus fastidious)尿酸酶4种突变体成对组合,使其催化效力比值在1.3-4.1间变化;将每种突变体表达载体转化大肠杆菌,取30个克隆分别转移到1.0 mL液体培养基放大,18℃诱导表达16 h,收集细胞后超声裂解得裂解液.在pH 8.9的Tris-HCl缓冲液中0.33 mmol/L以下尿酸对XOAHP法测定尿酸酶活性无干扰.SDS-PAGE分析发现不同突变体蛋白表达丰度有差异,酶活性同裂解液中总蛋白浓度正相关.Receiver-operation-curve(ROC)分析发现尿酸酶间催化效力比值越大,则所得曲线下面积(Area-under-the-curve,AUC)越接近1.00,此比值接近1.8时AUC约0.95.以突变体与起始物的酶活性浓度差值超过起始物标准差1.4倍为阈值,能识别催化效力达起始物1.8倍以上的突变体.因此,用XOAHP法测定裂解液中尿酸酶活性,以起始物活性均值加标准差1.4倍为阈值,有望高通量筛选尿酸酶突变体库.
其他文献
随着美国"亚太再平衡"和"新丝绸之路"战略的实施,孟加拉国的战略地位凸显,在此背景下,美国对孟加拉国的外交变得更加积极,两国关系呈现出向"战略伙伴"方向发展的趋势。奥巴马
上海轨道交通11号线的盾构施工期间需在真南路站～上海西站站间穿越京沪、沪昆铁路，且铁路沿线两侧管线密布，为保证进出上海站铁路大动脉的安全及正常行车要求，介绍了盾构穿越施工
在新时代创新社会治理的背景下,应急管理体制也应该与时俱进地加以调整完善,其中加强政府与社会力量协同、鼓励社会力量有序参与应急管理是重要发展方向。在实践中,社会力量
唐传奇开山之作《古镜记》不仅注重主人公的人性化建构,而且对于次要人物的塑造也加强了力度。鹦鹉是《古镜记》中第一个被宝镜降服的异类精怪。作者通过悉心描摹,为读者呈现
<正> 当归四逆汤出自《伤寒论》351条,全方由当归、桂枝、芍药、细辛、甘草、大枣七味药组成,具有养血通脉,温经散寒之功效,笔者以此方加味,灵活用于一些阴寒凝滞之证,常获良
对国际先进的信息可视化软件CiteSpace进行了简单介绍,并借助CiteSpace3.4.R1绘制了倦怠领域的关键词共现时区视图,演绎了该领域研究热点随时间的变化;借助文献共被引聚类视
气管插管对解决呼吸道梗阻，抢救生命有重要的作用，而一旦气管插管后，鼻咽部对气体的温湿化重要作用就消失了［1］，未经温湿化的气体吸入后导致下呼吸道失水、黏膜干燥、分泌物干燥及
文章以廊坊博物馆为例,基于对地域文化与博物馆文创产品开发之间关系分析,从地域文化视角,并结合廊坊地域文化分析,探索具有廊坊地域特色的博物馆文创产品开发策略。
目的体会循证护理在晚期肺癌疼痛护理中的价值。方法随机选取我院2016年10月-2018年10月收治的30例晚期肺癌患者,将所有患者依据偶数分组法分成对照组和观察组,每组各15例,对