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【摘要】大肠癌是临床最常见的高发肿瘤之一。目前治疗仍以手术切除为主，但单纯行根治性手术存在高复发、转移的风险，影响患者后期生存。术后辅助化疗可以降低大肠癌患者术后复发、转移风险及病死率。奥沙利铂（oxaliplatin）作为辅助化疗方案中的主要药物之一，其疗效已经得到了认可。但仍有很大一部分患者因复发转移而死亡，其原因可能是患者获得性或先天性的耐药所致。
【关键词】Ercc1；大肠癌；耐药；蛋白；关系
doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2014.04.111文章编号：1004-7484（2014）-04-1906-01大肠癌是临床最常见的高发肿瘤之一。目前治療仍以手术切除为主，但单纯行根治性手术存在高复发、转移的风险，影响患者后期生存。术后辅助化疗可以降低大肠癌患者术后复发、转移风险及病死率。奥沙利铂（oxaliplatin）作为辅助化疗方案中的主要药物之一，其疗效已经得到了认可。但仍有很大一部分患者因复发转移而死亡，其原因可能是患者获得性或先天性的耐药所致。研究认为核酸切除修复（nucleotide excision repair，NER）是患者产生铂类耐药的重要机制之一，切除修复交叉互补基因l（excision repair cross-complementingl，ERcc1）是NER途径中的关键基因。为此，我们通过研究探讨了大肠癌组织ERCCI表达及其与术后奥沙利铂治疗疗效及预后的关系。1资料与方法
1.1材料收集人民医院普外科手术切除的大肠癌标本共50例，均有完整的临床资料和明确的病理诊断；同期正常大肠切缘粘膜组织（简称：正常大肠组织）40例。50例大肠癌病人中，男性36例，女性14例；病人年龄24-82岁，平均年龄58.5岁；大体分型：隆起型16例，溃疡型29例，其它5例；组织学分级：高分化10例，中分化33例，低分化7例；肿瘤部位：直肠28例，结肠22例；淋巴结转移：有28例，无22例；r1NM分期（AJCC肿瘤分期标准，第六版）：I期7例，II期16例，III期22例，IV期5例。全部病例术前均未接受过化疗和放疗。同期正常大肠切缘粘膜组织40例中男性22例，女性18例，病人年龄26-78岁，平均年龄61岁。所有组织均用10%福尔马林固定，常规石蜡包埋。
1.2实验方法Erccl具体步骤如下：①4um石蜡切片3张常规脱蜡及水化（其中一张HE染色用）。②PBS缓冲液冲洗2次，每次3分钟。③枸椽酸高压修复3分钟。④置室温10分钟。⑤PBS缓冲液冲洗2次，每次3分钟。⑥3%H2O2室温孵育10分钟。⑦PBS缓冲液冲洗2次，每次3分钟。⑧加一抗ERCCI（1：70），4℃过夜。⑨PBS缓冲液冲洗2次，每次3分钟。⑩滴加试剂1，37℃放置20分钟。○11PBS缓冲液冲洗2次，每次3分钟。○12滴加试剂2，37℃放置25分钟。○13PBS缓冲液冲洗2次，每次3分钟。○14DAB显色5分钟。○15自来水充分冲洗，苏木素复染，脱水，二甲苯透明，中性树脂封片。用PBS替代一抗作为空白对照。
1.3结果判定Erccl：实验结果判断标准参照Fromowitz等综合计分法，由阳性着色细胞所占百分数与细胞着色强度二者结合起来计算.阳性细胞百分数为10个视野阳性细胞的平均数占这10个视野中细胞数的百分比：<5%计0分；5%-25%计1分；26%-50%计2分；51%-75%计3分；）75%计4分。细胞着色强度：不着色计0分；淡黄色计1分；棕黄色计2分；棕褐色计3分。二者积分相加：0-1分为阴性，2分为阳性。
1.4统计分析采用SPSS13.0统计软件包进行统计学分析，ERCCI表达与生存期的生存率采用Log-rank检验，P<0.05为差异有统计学意义。总体生存分析的比较用Kapla-Meier生存曲线表示。影响大肠癌预后的多因素分析采用COX回归分析。2结果
2.1ERCCI主要在肿瘤细胞核内，呈棕黄色，颗粒状；在某些肿瘤细胞的胞质中也有表达，集中于核膜周围。
2.2在研究的总体病例中，术后经奥沙利铂化疗后的患者5年DFS为52.0%，5年OS为68%。其中ErccI阴性表达为49例，5年DFS为73.5%，5年05为81.6%（40/49）；阳性表达为51例，5年DFS为31.4%，5年OS为54.9%（28/51）；Kaplan-Meier生存曲线显示阴性表达组DFS和OS优于阳性组，Log—rank检验两者总体DFS（P=0.000）和OS（P=0.000）比较有统计学差异。3讨论
【关键词】Ercc1；大肠癌；耐药；蛋白；关系
doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2014.04.111文章编号：1004-7484（2014）-04-1906-01大肠癌是临床最常见的高发肿瘤之一。目前治療仍以手术切除为主，但单纯行根治性手术存在高复发、转移的风险，影响患者后期生存。术后辅助化疗可以降低大肠癌患者术后复发、转移风险及病死率。奥沙利铂（oxaliplatin）作为辅助化疗方案中的主要药物之一，其疗效已经得到了认可。但仍有很大一部分患者因复发转移而死亡，其原因可能是患者获得性或先天性的耐药所致。研究认为核酸切除修复（nucleotide excision repair，NER）是患者产生铂类耐药的重要机制之一，切除修复交叉互补基因l（excision repair cross-complementingl，ERcc1）是NER途径中的关键基因。为此，我们通过研究探讨了大肠癌组织ERCCI表达及其与术后奥沙利铂治疗疗效及预后的关系。1资料与方法
1.1材料收集人民医院普外科手术切除的大肠癌标本共50例，均有完整的临床资料和明确的病理诊断；同期正常大肠切缘粘膜组织（简称：正常大肠组织）40例。50例大肠癌病人中，男性36例，女性14例；病人年龄24-82岁，平均年龄58.5岁；大体分型：隆起型16例，溃疡型29例，其它5例；组织学分级：高分化10例，中分化33例，低分化7例；肿瘤部位：直肠28例，结肠22例；淋巴结转移：有28例，无22例；r1NM分期（AJCC肿瘤分期标准，第六版）：I期7例，II期16例，III期22例，IV期5例。全部病例术前均未接受过化疗和放疗。同期正常大肠切缘粘膜组织40例中男性22例，女性18例，病人年龄26-78岁，平均年龄61岁。所有组织均用10%福尔马林固定，常规石蜡包埋。
1.2实验方法Erccl具体步骤如下：①4um石蜡切片3张常规脱蜡及水化（其中一张HE染色用）。②PBS缓冲液冲洗2次，每次3分钟。③枸椽酸高压修复3分钟。④置室温10分钟。⑤PBS缓冲液冲洗2次，每次3分钟。⑥3%H2O2室温孵育10分钟。⑦PBS缓冲液冲洗2次，每次3分钟。⑧加一抗ERCCI（1：70），4℃过夜。⑨PBS缓冲液冲洗2次，每次3分钟。⑩滴加试剂1，37℃放置20分钟。○11PBS缓冲液冲洗2次，每次3分钟。○12滴加试剂2，37℃放置25分钟。○13PBS缓冲液冲洗2次，每次3分钟。○14DAB显色5分钟。○15自来水充分冲洗，苏木素复染，脱水，二甲苯透明，中性树脂封片。用PBS替代一抗作为空白对照。
1.3结果判定Erccl：实验结果判断标准参照Fromowitz等综合计分法，由阳性着色细胞所占百分数与细胞着色强度二者结合起来计算.阳性细胞百分数为10个视野阳性细胞的平均数占这10个视野中细胞数的百分比：<5%计0分；5%-25%计1分；26%-50%计2分；51%-75%计3分；）75%计4分。细胞着色强度：不着色计0分；淡黄色计1分；棕黄色计2分；棕褐色计3分。二者积分相加：0-1分为阴性，2分为阳性。
1.4统计分析采用SPSS13.0统计软件包进行统计学分析，ERCCI表达与生存期的生存率采用Log-rank检验，P<0.05为差异有统计学意义。总体生存分析的比较用Kapla-Meier生存曲线表示。影响大肠癌预后的多因素分析采用COX回归分析。2结果
2.1ERCCI主要在肿瘤细胞核内，呈棕黄色，颗粒状；在某些肿瘤细胞的胞质中也有表达，集中于核膜周围。
2.2在研究的总体病例中，术后经奥沙利铂化疗后的患者5年DFS为52.0%，5年OS为68%。其中ErccI阴性表达为49例，5年DFS为73.5%，5年05为81.6%（40/49）；阳性表达为51例，5年DFS为31.4%，5年OS为54.9%（28/51）；Kaplan-Meier生存曲线显示阴性表达组DFS和OS优于阳性组，Log—rank检验两者总体DFS（P=0.000）和OS（P=0.000）比较有统计学差异。3讨论