【摘 要】
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采用电子克隆方法克隆到大小为925 bp的人天然免疫蛋白BCL10的猪同源基因完整cDNA序列(GenBank登录号:EU088132),并利用RT-PCR方法从猪的全血中扩增出包含702bp的完整开放读
【机 构】
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西北农林科技大学动物医学院预防兽医学系病毒免疫与生物信息研究室
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采用电子克隆方法克隆到大小为925 bp的人天然免疫蛋白BCL10的猪同源基因完整cDNA序列(GenBank登录号:EU088132),并利用RT-PCR方法从猪的全血中扩增出包含702bp的完整开放读码框架(ORF)的cDNA片段.经核酸测序,证明与电子克隆结果相符.利用NCBI BLAST分析该cDNA包含3个大小为57 bp,289 bp和356 bp的外显子,并且定位于猪的4号染色体上.采用半定量PCR技术检测基础水平猪各组织BCL10基因mRNA表达丰度,并将该基因构建到带有绿色标签的真核表达载体pEGFP-C1中,采用脂质体转染法将该基因转入PK-15细胞,通过绿色荧光标记和RT-PCR方法检测实验组的BCL10蛋白表达.研究结果表明,BCL10基因mRNA在脾脏中表达最高;胸腺、大脑和淋巴结表达次之,而肝脏只有微量表达,肾脏没有检测到表达;同时BCL10基因在PK-15细胞中得到了有效表达.
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